一、补肾活血化痰方对AD大鼠学习记忆功能及脑神经元型一氧化氮合酶的影响（论文文献综述）
孙成成[1]（2021）在《基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制》文中研究表明血管性认知障碍（Vascular cognitive impairment,VCI）是包括一系列因血管因素引起或导致的认知能力下降的综合征,涵盖了与血管疾病相关的所有类型的认知障碍,范围从轻度认知障碍到血管性痴呆（Vascular dementia,VaD）。目前,由于临床表现的异质性和当前诊断标准的局限性,VCI的流行病学较难开展,随着我国人口老龄化加剧及脑血管疾病的发病率上升,VCI的发病率和患病率也不断上升。VCI病因及病理机制复杂,与机体炎症反应、自由基损伤、胆碱能受损、细胞凋亡及遗传等因素密切相关,但VCI仍被认为是可以防治的。目前,VCI的主要治疗方法是通过治疗脑血管疾病和其他VCI危险因素（例如高血压和糖尿病）来预防,目前尚无可改善疾病的有效药物治疗方法。本课题组拟定了防治VCI的中药复方—参麻益智方,已批准为医疗机构应用传统工艺配制中药制剂备案（备案号:Z20200005000）。该方由人参、天麻、鬼箭羽、川芎组成,具有益气增智、活血化瘀的功效。前期动物实验和临床研究表明参麻益智方可以改善VCI大鼠及患者认知和神经功能。由此,本研究以参麻益智方作为干预药物,观察其对VCI模型大鼠的学习记忆和认知能力的影响及其对脑组织线粒体的超微结构和AMPK/PPARα/PGC-1α/UCP2信号通路的影响,探讨其对脑组织能量代谢的作用机制,为其防治VCI提供科学依据。目的确定参麻益智方的提取工艺及主要有效成分;观察参麻益智方对双侧颈总动脉结扎造成慢性脑缺血致血管性认知障碍模型大鼠的学习记忆能力和炎症因子及氧化应激相关指标的影响;探讨慢性脑低灌注大鼠脑能量代谢和线粒体障碍相关蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的病理机制及参麻益智方的干预效应机制及可能的作用靶点。方法采用液相色谱-质谱联用仪系统（liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）分析参麻益智方的主要化学成分。SPF级SD大鼠70只,雌雄各半,采用双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑缺血模型,手术成功后筛选认知障碍的大鼠按随机数字表分成4组:模型对照组（Model）、盐酸多奈哌齐组（Donepezil）（0.45 mg/kg体质量）、参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）（11.88 g生药/kg体质量）和参麻益智方低剂量组（SMYZ-L）（2.97g生药/kg体质量）。另设假手术组（Sham）,每组各10只大鼠。灌胃给药,模型对照组和假手术组给予等体积纯净水灌胃,连续灌胃8周后进行相关指标检测。Morris水迷宫（Morris water maze,MWM）检测大鼠学习记忆能力;HE染色法观察大鼠海马CA1区病理形态学改变;比色法检测血清中乙酰胆碱（acetylcholine,Ach）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AchE）含量;酶联免疫法测定大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）含量;比色法检测谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）含量;非酶促免疫法检测谷胱甘肽过氧化物还原酶（glutathioneperoxidase,GSH-PX）含量。透射电子显微镜观察线粒体的超微结构和形态改变;脑组织中提取线粒体进行逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5AmRNA表达的水平;蛋白质免疫印迹法（Western Blot,WB）检测 AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A 蛋白的表达。结果1参麻益智方成分稳定明确课题组采用液相色谱-质谱联用仪系统分析了参麻益智方的主要化学成分,并结合文献报道,确定了参麻益智方中人参皂苷、天麻素、阿魏酸、原儿茶酸、β-谷甾醇等多种主要化学成分。2参麻益智方对VCI大鼠学习记忆能力的影响2.1参麻益智方对VCI大鼠空间学习记忆能力的影响定位航行实验:与第1天相比,所有大鼠在训练第2天的逃避潜伏期（escape latency,EL）均明显缩短（P<0.05,P<0.01）,提示所有大鼠均表现出一定的学习记忆能力。经重复测量方差分析,与对照组比较,模型组大鼠第三天开始EL明显延长,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,提示模型组大鼠的空间学习能力明显下降;与模型组比较,参麻益智方高剂量组和盐酸多奈哌齐组EL均明显缩短,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,提示参麻益智方和盐酸多奈哌齐均可提高VCI大鼠的空间学习能力。空间探索实验:与假手术组比较,模型组穿越原平台次数、目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组穿越原平台次数均显着增加,参麻益智方高剂量组目标象限停留时间、目标象限活动路程均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。2.2参麻益智方对VCI大鼠海马CA1区病理形态的影响光学显微镜下海马组织显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元排列整齐,连接紧密,胞内结构完整,胞膜清晰,胞质丰富,核膜、核仁较明显,未见神经元变性或坏死。模型组大鼠的海马CA1区神经元排列散乱、稀疏,细胞数量明显减少,层次减少,部分出现核固缩现象,可见细胞空泡变性,甚至坏死现象。盐酸多奈哌齐组、参麻益智方低、高剂量组海马CA1区神经元排列较模型组有一定的改善,细胞数量较模型组有明显增加,细胞结构较完整,细胞膜较为清晰,偶见细胞空泡变性,少有细胞坏死现象。2.3参麻益智方对VCI大鼠血清Ach、AchE含量的影响与假手术组比较,模型组Ach含量显着减少,AchE含量显着增多,统计学比较有显着差异（P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组Ach含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组AchE含量显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。各给药组之间比较无显着差异（P>0.05）。2.4参麻益智方对VCI大鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α含量的影响与假手术组比较,模型组IL-1β、TNF-α含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组IL-1β含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.01）;盐酸多奈哌齐组和参麻益智方低、高剂量组TNF-α含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。2.5参麻益智方对VCI大鼠血清GSH、MDA、SOD、GSH-PX含量的影响与假手术组比较,模型组GSH、GSH-PX含量均显着减少,MDA含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量组GSH、GSH-PX含量均显着增加,MDA含量均显着减少,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）;参麻益智方高剂量组SOD含量均显着增加,统计学比较有显着差异（P<0.05,P<0.01）。各给药组之间比较无显着差异（P>0.05）。3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体的影响3.1参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体数量的影响参麻益智方干预后荧光显示线粒体数量有一定程度的增加,说明参麻益智方能增加双侧颈总动脉结扎所致的VCI大鼠的线粒体数量。3.2参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体超微结构的影响假手术组大鼠脑组织线粒体结构基本正常,排列整齐,膜形态基本完整,线粒体嵴致密,无明显肿胀和空泡形成。模型组大鼠脑组织线粒体结构明显改变,线粒体膜模糊,部分膜出现破裂,线粒体嵴断裂,疏松溶解,并伴有基质颗粒减少或消失。盐酸多奈哌齐组和参麻益智方高剂量、低剂量组线粒体结构明显改善,线粒体膜总体清晰,线粒体嵴基本完整,说明参麻益智方可以改善VCI大鼠脑组织线粒体结构。3.3参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A mRNA表达水平的影响与假手术组比较,模型组AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA表达水平明显低于对照组（P<0.05,P<0.01）。参麻益智方干预后,AMPK、PPARα、PGC-1α和ATP5A mRNA的表达均较模型组显着升高（P<0.05,P<0.01）。模型组UCP2mRNA表达高于假手术组,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）和参麻益智方低剂量组（SMYZ-L）UCP2mRNA表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。3.4参麻益智方对VCI大鼠脑组织线粒体关键蛋白AMPK、pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达的影响与假手术比较,模型组pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,参麻益智方高剂量组（SMYZ-H）pAMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2、ATP5A蛋白表达水平均显着升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。而AMPK蛋白表达水平无明显差异,提示AMPK可能通过磷酸化参与此途径。结论1确定了参麻益智方的最佳提取工艺及主要化学成分,为探讨其防治VCI的药理作用和机制研究提供了化学物质基础。2脑组织线粒体结构改变和能量代谢障碍可能是VCI的重要病理基础。3参麻益智方具有提高慢性脑低灌注致VCI大鼠学习记忆能力的作用,并改善海马组织的病理形态,保护神经元,增强胆碱能系统功能,抑制炎症反应,提高机体抗氧化能力。其作用机制和提高线粒体关键蛋白AMPK、PPARα、PGC-1α、UCP2的表达,改善脑组织能量代谢相关。
张伟[2]（2021）在《从调控小胶质细胞极化研究益肾化浊方改善阿尔茨海默病神经炎症反应的作用机制》文中进行了进一步梳理目的观察益肾化浊方（Yishen Huazhuo Decoction,YHD）对4月龄SAMP8小鼠海马区小胶质细胞（Microglia,MG）极化及其相关靶点的影响,研究YHD通过减轻神经炎症反应改善阿尔茨海默病记忆能力减退的部分作用机制。方法将45只4月龄雄性SAMP8小鼠,按每组15只随机分为模型（P8）组、中药（YHD）组以及阳性对照（Ibuprofen）组;取15只4月龄雄性SAMRl小鼠作为对照（R1）组。每日同时对各组小鼠进行灌胃干预,YHD组按6.24g·kg-1予YHD冻干粉水溶液,Ibuprofen组按0.026g·kg-1予布洛芬颗粒水溶液,其余两组按10m L·kg-1均予等量蒸馏水,共持续12w。采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力;采用尼氏染色观察海马CA1区神经元排列和计数;采用免疫荧光双标检测MG标志物i NOS/Arg-1的表达;采用Western blot检测PU.1、TREM2、PPARγ与NF-κB蛋白的表达;采用ELISA检测炎症因子TNF-α与IL-10的表达;采用q PCR检测转录因子PU.1与TREM2的基因表达。结果（1）Morris水迷宫结果（1）各组小鼠首日游泳速度差异无统计学意义（P>0.05）。（2）各组逃避潜伏期时间均表现为下降趋势,且5天趋势大致相同。经重复测量方差分析发现,P8组和Ibuprofen组比R1组显着延长（P<0.05）;YHD组比P8组显着缩短（P<0.05）,Ibuprofen组和P8组相比差异无统计学意义（P>0.05）。（3）穿越平台次数:相比于R1组小鼠,P8和Ibuprofen两组显着减少（P<0.05）;YHD组比P8组显着增多（P<0.05）,Ibuprofen组与P8组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（4）初始角:P8组和Ibuprofen组相对于R1组显着增大（P<0.05）;YHD组比P8组显着缩小（P<0.05）,Ibuprofen组与P8组比较,神经元计数无显着差异（P>0.05）。（2）尼氏染色结果R1组神经元排列紧凑有序,细胞边界清晰规则,神经元缺失较少。P8组神经元排列较为杂乱,有较多形状不规则或破裂的死亡细胞,神经元缺失较多。与P8组相比,YHD组神经元排列较为整齐,细胞形态相对规则、边界相对清晰,部分区域出现神经元丢失;Ibuprofen组神经元排列较为紧凑但细胞边界相对模糊,部分区域因神经元缺失出现空泡。海马CA1区神经元计数:与R1组比较,P8、YHD、Ibuprofen组神经元数量显着减少（P<0.05）;与P8组进行比较,YHD、Ibuprofen组海马CA1区神经元数量显着增多（P<0.05）;YHD组与Ibuprofen组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（3）免疫荧光双标、Western blot、ELISA以及q PCR检测结果免疫荧光双标显示:与R1组相比,P8组小鼠海马区iNOS表达显着增多、Arg-1表达显着减少（P<0.05）;与P8组比较,YHD组小鼠海马区i NOS表达显着减少、Arg-1表达显着增多（P<0.05）;而YHD组与Ibuprofen组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。Western blot结果发现:与R1组比较,P8组PU.1、TREM2、PPARγ蛋白相对表达量显着降低,NF-κB显着升高（P<0.05）;相较于P8组,YHD组和Ibuprofen组均发现PU.1、TREM2、PPARγ蛋白相对表达量显着升高,NF-κB显着降低（P<0.05）;且YHD组与Ibuprofen组相比未见统计学差异（P>0.05）。ELISA结果发现:与R1组相比,P8组海马中TNF-α表达水平显着升高,IL-10表达水平显着降低（P<0.05）;与P8组相比,YHD和Ibuprofen组TNF-α表达显着减少,IL-10表达显着增多（P<0.05）;YHD组与Ibuprofen组比较无统计学差异（P>0.05）。qPCR结果发现:与R1组比较,P8组海马中PU.1表达显着降低（P<0.05）,TREM2表达有降低趋势;与P8组比较,YHD组与Ibuprofen组PU.1表达显着升高（P<0.05）,TREM2表达有升高趋势;YHD与Ibuprofen两组比较无统计学差异（P>0.05）。结论（1）YHD可有效改善4月龄SAMP8小鼠学习和记忆能力减退,该作用与减轻脑内神经炎症反应,进而减少海马神经元缺失有关。（2）YHD减轻4月龄SAMP8小鼠脑内神经炎症反应的作用机制可能与激活PU.1/TREM2/PPARγ通路,抑制NF-κB表达,促进MG向M2型极化,抑制其向M1型极化,进而促进抑炎因子的释放、抑制促炎因子的释放有关。
陈思馨[3]（2020）在《健脾益智法调节AD大鼠脑内尿素代谢的作用机制研究》文中认为理论研究部分,目的:旨在从“浊邪”在脑中异常堆积导致阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）的角度探讨该病的发病机制及防治方法,通过用中医理论逐条分析AD的症状,分析脑的生理病理特点,阐明AD病位在脑,与脾胃关系密切,探讨脾胃与AD的关系,最终得出健脾益智法可以通过脾胃的功能改善浊邪在脑中的异常堆积状况,达到治疗AD的理论依据。方法:回顾和总结了中医学对于AD相关症状的记载与认识,将中医理论的认知过程与AD认知衰退量表相结合,利用解剖学和中医传统理论结合,梳理脑与五脏的关联及脑的生理病理特点,归纳和分析脾胃与AD的内在联系,结合健脾益智汤组方分析及导师团队前期研究,为健脾益智法从祛浊角度治疗AD提供了理论依据。结果:在中医理论系统中,AD病名虽未被直接提出,但AD的症状都有相关描述,AD的认知衰退量表GDS与《内经》中描述的认知过程密切相关,病位在脑的原因与脑的生理病理特性相关,其发病与五脏皆有联系,但脾胃功能失常是其根本的病因。无论是从脾胃是后天之本,负责保障其他脏腑的正常生理功能运行,或是脾胃自身的主运化,主升清降浊的功能,亦或者现代的实验或临床研究,都可为从脾胃论治AD提供详实的依据。健脾益智汤从认知衰退过程,脑的病理特性论治AD,以健脾益气,升清降浊为基本治法,在基础和临床研究中均表现出较好的疗效,健脾益智汤中所含药物也对AD有着有益的成分,可以发挥联合靶向作用,提高疗效。实验研究部分,目的:通过构建AD大鼠模型,采用行为学、脲酶法、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附剂测定法、蛋白检测法,旨在观察和分析健脾益智汤对模型大鼠学习记忆能力、脑内尿素含量、相关尿素转运蛋白及基因、尿素循环相关酶指标的影响,探讨和分析健脾益智汤对改善模型大鼠学习记忆能力的影响,及可能机制。方法:采用SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、健脾益智汤组、吡拉西坦组。采用海马区注射A β1-40的方法制备AD实验动物模型。各组术后第2周起开始灌胃,分别持续7天,14天,28天,14.4ml/kg/d,每日1次,西药组给与吡拉西坦,加生理盐水制成混悬液,14.4ml/kg/d,每日一次,其余各组给予同等剂量的生理盐水。采用Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力,观察和探健脾益智法对模型大鼠学习记忆的影响。采用脲酶法观察和分析各组大鼠脑内尿素含量,实时荧光定量PCR法检测SLC14A1基因mRNA表达情况,Western blot法检测UTB蛋白含量,ELISA法检测尿素循环相关酶ARG、OTC、CPS、ASS、ASL含量,从尿素代谢角度探讨健脾益智汤改善模型大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果:1.Morris水迷宫:在治疗7天、14天、28天组中,模型组定位航行逃避潜伏期明显延长,空间探索实验穿台次数明显减少,目标象限探索时间明显减低,与对照组比较,有显着性差异（P<0.01）;与模型组相比,健脾益智汤组与吡拉西坦组逃避潜伏期及穿台次数明显增多（P<0.01或P<0.05）,且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。2脲酶法检测:在治疗7天、14天、28天组中,模型组脑内尿素含量明显增加,与对照组比较,有显着性差异（P<0.01）;与模型组相比,健脾益智汤组与吡拉西坦组可有效降低大鼠脑内尿素含量（P<0.01或P<0.05）,且健脾益智汤组的改善效果随着治疗天数的增加而有所增强。3.实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测:在治疗7天、14天、28天组中,与对照组比较,模型组脑内SLC14A1基因mRNA相对表达水平与UTB蛋白含量均有明显降低（P<0.01）。在治疗7天组中,与模型组相比,健脾益智汤组与吡拉西坦组对SLC14Al和UTB均无统计学意义上的差异（P>0.05）。在14天组和28天组中,健脾益智汤组与吡拉西坦组相比于模型组,均能一定程度的升高SLC14A1mRNA相对表达水平和UTB蛋白含量（P<0.05或P<0.01）。通过对7天,14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内SLC14AlmRNA比较,可发现各组均无显着升高或降低,差异无统计学意义（P>0.05）,而对比UTB含量,治疗28天的健脾益智汤组和吡拉西坦组均比治疗7天时升高更多（P<0.05）。4.酶联免疫吸附检测:在治疗7天、14天、28天组中,与对照组比较,模型组脑内ARG、ASS含量均有明显升高（P<0.01或P<0.05）,ASL含量有所下降,但无统计学意义。与模型组相比,在治疗7天时,健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量有所下降,ASL含量有所升高,但无统计学意义（P>0.05）;在治疗14天和28天时,健脾益智汤组与吡拉西坦组ARG、ASS含量明显下降（P<0.01或P<0.05）,ASL含量有所上升,但无统计学意义（P>0.05）。通过对7天,14天和28天不同时间节点的各组大鼠脑内ARG、ASS、ASL含量比较,可发现对照组,假手术组,模型组均无显着升高或降低（P>0.05）,健脾益智汤组和吡拉西坦组均有随着治疗时间增加而降低效果更佳,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.AD各症状在中医理论中均有描述,评价AD认知功能的认识衰退量表GDS与《内经》中认知过程各阶段相吻合,AD的病位在脑,脑因其独特的生理病理特点,与五脏的功能密切相关,而五脏的正常运行又赖于后天之本脾胃,故在防治AD时,应重视脾胃的调节。2.浊邪阻滞是AD发病的重要病机,脑内过量尿素的堆积是浊邪的一种,脾胃主升清降浊,从脾胃论治AD有据可依,健脾益智汤可通过组方药物的协同作用,调节脾胃功能,使清浊升降相因,对AD发挥整体治疗效果。3.大鼠颅内海马区注射Aβ 1-40造模方式成功构建了 AD模型,健脾益智汤可有效改善AD大鼠学习记忆能力;4.模型大鼠出现脑内尿素含量升高,健脾益智汤可能通过上调SLC14A1基因和UTB蛋白表达,提高尿素转运能力,或是通过下调ARG、ASS酶活性,使尿素生成减少或降低炎症细胞因子的表达水平而达到改善学习记忆障碍的作用。5.健脾益智汤对AD模型大鼠的行为学及脑内尿素水平改善与用药时间正相关,故通过健脾胃而益智需要一定的服药周期。
高玲[4]（2019）在《基于PI3K/Akt信号通路探讨益髓解毒法对血管性痴呆大鼠作用机制的研究》文中提出目的:本研究基于“脑髓”理论,从中风病“髓虚毒损”的病机关键入手,通过行为学、病理学、分子生物学等研究手段,对VD大鼠的认知功能、海马病理及超微结构变化、海马组织PI3K/Akt细胞信号转导通路相关蛋白、基因表达等方面进行检测和分析,探讨益髓解毒法对VD大鼠认知功能及海马神经元损伤和凋亡的作用及机制,为VD的中医病机认识和治疗提供新的作用靶点和实验证据。方法:1.将健康SPF级雄性SD大鼠,行双侧颈总动脉永久性结扎法（2-VO）,复制VD动物模型,将造模成功的大鼠随机分为5组,分别是血管性痴呆模型组（模型组）、盐酸多奈哌齐对照组（阳性对照组）、益髓解毒高、中、低剂量组（中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组）,每组各15只,另选取15只只分离未结扎颈总动脉的大鼠作为假手术组。造模后第2d开始灌胃治疗,各组每日灌胃药物及剂量分别是,假手术组和模型组:0.9%生理盐水;阳性对照组:盐酸多奈哌齐溶液,0.052mg/kg;中药高、中、低剂量组:益髓解毒中药复方农本方颗粒溶液,22.22g/kg、11.11g/kg、5.56g/kg,等体积（1mL/100g）灌胃,持续30d治疗结束。2.Morris水迷宫对大鼠进行行为学功能监测,灌胃治疗结束后第1天开始水迷宫测试,通过定位航行实验和空间探索实验,分析益髓解毒法对VD大鼠学习和记忆功能的影响。3.通过对大鼠海马组织HE染色和海马组织透射电镜超微结构观察,分析益髓解毒法对VD大鼠海马病理组织及海马神经元超微结构的干预效果。4.应用Nissl染色和TUNEL（绿色荧光）细胞凋亡检测法,分析益髓解毒法对VD大鼠海马组织内尼氏体及神经元阳性细胞数量和海马组织细胞凋亡的干预作用。5.应用IHC法、Western-blot法、Rt-PCR法检测PI3K/Akt信号通路相关因子PI3K、Akt、p-Akt、Caspase-9、Caspase-3、NF-κB、Bad的蛋白及mRNA表达的变化,分析益髓解毒法对VD大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:1.行为学监测结果:在定位航行实验结果中,与假手术组比较,VD模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,中药中剂量组和阳性对照大鼠的逃避潜伏期明显缩短（P<0.05,P<0.01）,差异具有统计学意义。在空间探索实验中,与假手术比较,VD模型组大鼠首次到达平台的时间明显延长,平台象限停留时间及穿越平台次数明显减少;中药中剂量组大鼠首次到达平台的时间明显缩短,平台象限停留时间及穿越平台次数明显增加,与模型组比较,差异显着（P<0.05,P<0.01）。2.海马病理组织检测结果:HE染色结果:VD大鼠模型组海马组织CA1区的神经元结构欠完整,形态不规则,排列疏松而紊乱,细胞间质水肿明显,细胞核固缩深染,神经元与周围组织间隙增宽,神经元丢失明显。与模型组比较,中药中剂量组大鼠海马CA1区的神经元结构相对完整,形态较规则,层次较清晰,细胞间质水肿不及模型组明显,细胞核固缩减少,神经元与周围组织间隙缩小,神经元可见少量丢失。TEM结果:模型组海马CA1区神经元细胞核形态异常,异染色质增多,细胞器排列紊乱,线粒体结构不完整,有嵴和膜融合现象,空化严重,嵴出现断裂和缺失。与模型组比较,中药中剂量组:神经元结构较完整,胞膜溶解程度较轻,线粒体空化和扩张明显减轻。3.干预海马细胞损伤及凋亡结果:Nissl染色结果:与假手术组比较,VD模型组大鼠海马神经元尼氏小体丢失明显,染色变浅,神经元阳性细胞数目明显减少（P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组与中药中剂量组神经元胞体内尼氏小体染色明显,神经元阳性细胞数增多（P<0.05,P<0.01）,差异具有统计学意义。VD模型组大鼠海马TUNEL法检测凋亡细胞数明显多于假手术组,表明VD过程存在细胞凋亡;中药中剂量组可明显减少凋亡细胞数,与模型组比较,差异显着（P<0.01）。4.调控PI3K/Akt信号通路的相关因子结果:IHC检测结果:与假手术组比较,VD模型组大鼠海马Akt、p-Akt蛋白表达明显减少,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达明显增加（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,阳性对照组与中药中剂量组Akt、p-Akt蛋白表达明显增加,Caspase-9、Caspase-3蛋白表达明显减少,差异显着（P<0.05,P<0.01）。WB检测结果显示:与假手术组比较,VD模型组大鼠海马PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB蛋白表达明显减少,Caspase-9、Caspase-3、Bad蛋白表达明显增加（P<0.05,P<0.01）,两组比较差异显着,具有统计学意义。而中药中剂量组可明显上调PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB蛋白表达,下调Caspase-9、Caspase-3、Bad蛋白表达。Rt-PCR结果显示:模型组与假手术组相比,PI3KmRNA、AktmRNA、NF-κBmRNA水平明显降低,Caspase-9mRNA、Caspase-3mRNA、BadmRNA水平明显升高（P<0.05,P<0.01）。中药中剂量组可明显上调PI3KmRNA、AktmRNA、NF-κBmRNA表达,下调Caspase-9mRNA、Caspase-3mRNA、BadmRNA表达。结论:1.益髓解毒法可明显改善VD大鼠的学习和记忆等认知功能。2.益髓解毒法可明显改善VD大鼠海马组织病理结构,保护海马神经元超微结构的完整性,修复神经元损伤。3.益髓解毒法可明显增加VD大鼠海马神经细胞内尼氏小体的数量,修复神经受损功能,抗神经元细胞凋亡。4.益髓解毒法可明显上调大鼠海马组织内PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB蛋白和基因表达,下调Caspase-9、Caspase-3、Bad蛋白和基因表达,这可能是益髓解毒法通过调控PI3K/Akt信号通路相关因子表达,以解毒之法解“神经毒”性,抗细胞凋亡,以益髓之法修复神经元损伤,实现脑保护,从而改善VD学习和认知功能,发挥保护VD的作用机制之一。
邵亚兰[5]（2019）在《参附注射液治疗血管性痴呆的作用及分子机制的实验研究》文中指出第一部分参附注射液治疗血管性痴呆模型小鼠的作用及机制目的:初步观察探索参附注射液（Shenfu Injection,SFI）对血管性痴呆小鼠（Vascular dementia,VD）的治疗作用,并探索该机制是否与5-脂氧酶（5-lipoxygenase,5-LO）/白三烯（Leukotriene）和一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase,NOS）/一氧化氮（Nitric oxide,NO）通路有关。方法:1.雄性昆明小鼠,体重24-28g,随机分为假手术组、VD模型组、SFI低剂量组(5mL·kg-1)、SFI中剂量组(10mL·kg-1)、SFI高剂量组(20mL·kg-1),每组9只。通过双侧颈总动脉重复夹闭和再灌注以及腹腔内注射硝普钠来复制VD小鼠模型。造模第3天,药物组通过尾静脉注射给予不同剂量的SFI,假手术组和VD模型组给予相同量的生理盐水,记录SFI对VD模型小鼠体重变化。2.水迷宫实验:记录假手术组,VD模型组和低、中、高SFI组小鼠找到平台的时间。3.大脑组织病理变化:实验结束后取小鼠的大脑组织进行病理切片和HE染色,观察大脑组织病理损伤情况。4.ELISA检测假手术组,VD模型组和低、中、高SFI组小鼠血清中白三烯B4（Leukotriene B4,LTB4）和半胱氨酰白三烯（Cysteinyl leukotrienes,CysLTs）含量的变化。5.采用Griess法检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠血清中NO含量的变化。6.基因水平分析:q PCR检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、白三烯A4水解酶（Leukotriene A4 hydrolase,LTA4H）、白三烯C4合酶（Leukotriene C4 synthetase,LTC4S）、诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,iNOS）和神经型一氧化氮合酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS）mRNA的表达变化。7.蛋白水平分析:Western blot检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达。8.免疫组化检测假手术组,VD模型组,低、中、高SFI组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS在海马中的表达分布。结果:1.造模小鼠苏醒后按照Longa的5分评分标准进行评分,小鼠都在1分（提尾时右前肢内收,不能完全伸直）和2分（行走时向右侧旋转）的评分标准。2.从第二天开始,VD模型组和各剂量SFI组的小鼠活动量和进食量减少;在造模第4天,VD模型组小鼠体重显着低于假手术组（P<0.001）。给药第3天后,与VD模型组相比,各剂量SFI组小鼠体重均有不同程度的升高（P<0.05）,其中以SFI中剂量组体重上升最快。3.与假手术组相比,VD模型组和各用药组小鼠学习记忆时间显着增加,其中VD模型组小鼠所需时间最长。4.HE染色结果显示,假手术组小鼠海马神经元结构完整,细胞层次分明清晰,排列紧密;在VD模型组中,小鼠细胞层次凌乱,海马神经元表现出明显的核固缩;SFI各剂量组小鼠细胞层次凌乱有所减轻,中剂量组最佳。5.与假手术组相比,VD模型组小鼠血清中LTB4、CysLTs和NO的含量明显升高,不同剂量组SFI均能显着的降低VD小鼠血清中LTB4、CysLTs和NO含量（P<0.05）。6.与假手术组相比,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS mRNA的表达明显升高（P<0.05）,而中、高SFI组均能显着性降低小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS mRNA的表达（P<0.05）。7.与假手术组相比,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达显着增加（P<0.05）,而中、高SFI组均能显着性降低小鼠海马中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达（P<0.05）。8.免疫组化结果显示,VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS蛋白的表达明显升高,而中剂量可以显着降低VD模型组小鼠海马中5-LO、LTA4H、LTC4S、iNOS和nNOS蛋白的表达。结论:1.成功复制VD小鼠模型,其表现出明显的痴呆症状。2.SFI各剂量组均可增加小鼠体重,减轻小鼠痴呆症状,缩短VD模型组小鼠的学习和记忆时间,以及明显减轻小鼠大脑海马的病理损伤,表明SFI对VD模型组小鼠有治疗作用。3.首次显示VD发病机制可能涉及LTB4和CysLTs异常增加,SFI治疗VD的作用与其抑制LTB4和CysLTs合成有关。4.SFI降低VD小鼠血清中LTB4含量与其下调VD小鼠大脑海马组织LTB4合成酶系5-LO和LTA4H基因和蛋白的表达有关。5.SFI治疗VD小鼠的作用与其下调VD小鼠大脑海马组织iNOS和nNOS基因和蛋白的表达,使NO含量保持在合适的浓度有关。第二部分参附注射液对氧糖剥夺损伤PC12细胞的保护作用及其机制目的:初步探索参附注射液对VD离体模型-氧糖剥夺（Oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤PC12细胞的保护作用,探索其是否涉及5-LO/LTs和NOS/NO通路。方法:1.将15、17.5、20、22.5、25mmol·L-1连二亚硫酸钠（Na2S2O4）与PC12细胞共同孵育24h,MTT法检测细胞抑制率,确定Na2S2O4的最佳浓度。2.将50μL/mL、75μL/mL、100μL/mL、125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL、200μL/mL SFI与Na2S2O4诱导的PC12细胞共同孵育24h、48h、72h,通过MTT测定细胞存活率,确定SFI的合适浓度和时间。3.ELISA检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI 150μL/mL、SFI175μL/mL组细胞培养基上清中LTB4和CysLTs含量。4.Griess法检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI 150μL/mL、SFI175μL/mL组细胞培养基上清中NO含量的变化.5.基因水平分析:q PCR检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI150μL/mL、SFI 175μL/mL组细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA的表达变化。6.蛋白水平分析:蛋白印迹检测对照组,OGD模型组,SFI 125μL/mL、SFI150μL/mL、SFI 175μL/mL组细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS蛋白的表达情况。结果:1.与对照组相比,15、17.5、20、22.5、25mmol·L-1Na2S2O4剂量组与PC12细胞共同孵育24h均能显着抑制细胞活力（P<0.001）,且20mmol·L-1Na2S2O4剂量组,细胞抑制率达到47.49±1.85,接近50%。综合考虑,后续实验选择终浓度为20mmol·L-1Na2S2O4制作细胞模型。2.与OGD模型组相比,50μL/mL、75μL/mL、100μL/mL、125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL、200μL/mL剂量组SFI能够时间剂量依赖性的减轻Na2S2O4对PC12细胞的抑制作用（P<0.05）。150μL/mL剂量组SFI作用于PC12细胞24h后,细胞存活率最高,达到79.75±0.23。综合考虑,后续实验选用125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL剂量组SFI处理Na2S2O4诱导的PC12细胞,作用24h。3.与对照组相比,Na2S2O4诱导的PC12细胞培养基上清中LTB4、CysLTs和NO含量显着增加,SFI能剂量依赖性降低Na2S2O4诱导PC12细胞培养基上清LTB4、CysLTs和NO含量升高。4.与对照组相比,Na2S2O4诱导的PC12细胞中5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。与OGD模型组相比,125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL SFI剂量组细胞5-LO、LTA4H、iNOS和nNOS mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论:1.20mmol·L-1Na2S2O4与PC12细胞共同孵育24h,细胞抑制率接近50%,因此本实验选择该浓度孵育24h小时制作离体VD疾病模型。2.125μL/mL、150μL/mL、175μL/mL的SFI与Na2S2O4诱导的PC12细胞共同孵育24h,能显着提高PC12细胞的存活率,表明SFI对Na2S2O4诱导损伤的PC12细胞具有保护作用。3.SFI对Na2S2O4诱导损伤的PC12细胞的保护作用可能与其降低PC12细胞培养基上清中LTB4和CysLTs生成有关。4.SFI减少Na2S2O4诱导损伤的PC12细胞培养上清LTB4生成与其抑制LTB4合成酶系5-LO和LTA4H基因和蛋白的表达有关。5.SFI对Na2S2O4诱导损伤的PC12细胞的保护作用可能也与其下调iNOS和nNOS基因和蛋白的表达,降低PC12细胞培养上清中NO含量有关。
万博鹏[6]（2014）在《艾灸对Alzheimer病模型大鼠JNK信号通路及细胞凋亡相关因子影响的研究》文中进行了进一步梳理目的阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD），俗称老年性痴呆，是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，是老年人脑功能退化的一种表现，以进行性、不可逆性出现智能减退为主要临床特征，包括近期记忆、思维、认知、定向、理解、计算、判断能力等功能的减退和不同程度的人格异常改变。随着全球人口老龄化的加重，AD已经成为人类继心脏病、癌症和脑卒中之后第4位致死原因。AD患者晚期劳动能力丧失，生活不能自理，心理适应能力亦急剧下降，给家庭和社会造成沉重治疗负担。本课题采用双侧海马一次性注射聚集态Aβ25-35造成AD大鼠模型，运用艾条温和灸“肾俞”、“足三里”、“百会”进行治疗，从JNK信号通路介导的细胞凋亡反应的角度探讨AD模型大鼠脑内神经元损伤机制及艾灸干预的作用机制。方法健康雄性SD大鼠（15月龄）50只，体重（400±50）g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。提前1周将大鼠运到实验室适应性喂养，安静清洁环境下定时给以饮水及饲料。然后进行Y型水迷宫筛选，淘汰反应过于迟钝或特别敏感的大鼠，将合格大鼠按随机数字表法分为4组，每组10只，分别为正常组、假手术组、模型组、艾灸组。采用双侧海马一次性注射聚集态Aβ25-35造成AD大鼠模型，造模完成后第2日开始进行艾灸治疗，在大鼠“肾俞”、“足三里”、“百会”穴上方2～3cm处温和灸。每日治疗1次，每穴持续艾灸5min，6日为1疗程，疗程间休息1日，共3个疗程。Morris水迷宫法测定其学习记忆能力的行为学变化，HE染色及透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞结构的形态学变化，免疫组化SP法观察艾灸对AD模型大鼠海马区磷酸化JNK蛋白（p-JNK）、神经细胞凋亡的关键调控因子Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。全部数据输入计算机，用SPSS16.0统计软件包进行处理，所得数据以均数±标准差（x s）表示。结果（1）Morris水迷宫行为学试验发现，各组大鼠逃避潜伏期随着游泳天数的增加而逐渐缩短，但各组之间表现出的学习记忆能力有很大差异。大鼠双侧海马一次性注射Aβ25-35聚集液后，定位航行试验中，模型组大鼠5天平均潜伏期及后3天平均潜伏期均较其他组明显延长，大鼠在实验平台象限的游泳距离占游泳总距离百分比（象限百分比）明显减少；空间探索试验中，模型组大鼠跨越原平台位置的次数比其他各组明显减少，大鼠在实验平台象限的游泳距离占游泳总距离百分比（象限百分比）亦明显减少，与正常组及假手术组比较，有显着性差异（P<0.01）。说明模型组大鼠学习记忆能力受到严重损害，双侧海马一次性注射Aβ25-35制备AD模型成功。对AD大鼠采用艾灸治疗后，定位航行试验中，大鼠5天平均潜伏期和后3天平均潜伏期均明显缩短；空间探索试验中，大鼠跨越原平台位置的次数明显增多；在实验平台象限的游泳距离占游泳总距离百分比（象限百分比）明显增高，与模型组比较，经统计学分析，有显着性差异（P<0.01）。说明艾灸对AD模型大鼠的学习记忆功能具有明显改善作用，艾灸疗法是治疗学习认知功能障碍的有效方法之一，可广泛运用于临床。（2）HE染色观察结果显示，模型组大鼠海马CA1区神经细胞数量较正常组和假手术组明显减少，神经细胞受损缺失，细胞核固缩，核仁欠清晰，部分神经细胞呈现出月牙型、多齿形等凋亡形态。运用艾条温和灸“肾俞”、“足三里”、“百会”治疗后，大鼠海马CA1区神经细胞核固缩现象明显改善，形态较规则，排列较整齐。透射电镜观察结果显示，Aβ在大鼠脑内能引起海马CA1区神经细胞的退行性改变，神经元体积缩小，细胞核形态不规则，细胞浆和细胞器密度增高，细胞器结构受损，显示不清，线粒体肿胀，基质清淡、有空泡，数目减少，还可见到线粒体嵴呈畸形样改变，内质网扩张，脂褐素沉积增多。运用艾灸治疗后，大鼠海马CA1区神经细胞水肿较模型组明显减轻，内质网扩张及线粒体肿胀明显改善，高尔基体、线粒体、核糖体数目较模型组明显增多。表明艾灸治疗可抑制注射Aβ导致的大鼠海马区神经细胞损伤变性，促进神经细胞的修复，艾灸对AD模型大鼠海马神经细胞的退行性改变有明显改善作用。（3）模型组大鼠海马区p-JNK、Bax、Caspase-3阳性神经元计数较正常组、假手术组显着升高，Bcl-2阳性神经元计数则较正常组、假手术组显着降低，经统计学分析，均具有显着性差异（P<0.01）；艾灸组大鼠海马区p-JNK、Bax、Caspase-3较模型组表达明显下降，Bcl-2阳性神经元计数则较模型组明显升高，经统计学分析，均具有显着性差异（P<0.01）。结论（1）海马区注射Aβ25-35可以激活JNK信号转导途径，JNK的激活导致促凋亡蛋白Bax释放增多，抗凋亡蛋白Bcl-2释放减少，引起了Caspase级联反应，进而活化细胞凋亡的关键蛋白酶Caspase-3，启动了依赖Caspase通路的凋亡程序，从而诱导AD大鼠脑内神经元的退行性改变，引起大鼠学习记忆障碍。（2）艾灸治疗可引起p-JNK、Bax、Caspase-3在大鼠海马区的表达明显减少，Bcl-2的表达明显增多，可抑制注射Aβ导致的大鼠海马区神经细胞损伤变性，促进神经细胞的修复，艾灸对AD模型大鼠海马神经细胞的退行性改变有明显改善作用。（3）艾灸治疗AD的作用机制，可能是通过抑制JNK信号通路，减轻促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的释放,促进抗凋亡蛋白Bcl-2的产生，从而抑制脑内神经细胞的凋亡,减少神经元的变性丢失，进而改善Aβ所致的大鼠学习记忆障碍。
邓少东[7]（2013）在《巴戟天低聚糖益脑作用机制研究》文中认为目的:本设计以巴戟天中低聚糖类成分为研究对象,结合导师组前期研究基础开展巴戟天药材中低聚糖类成分的质控研究,及其低聚糖部位提取、纯化工艺研究,进一步完善巴戟天药材的质控体系。采用动物体内及体外等实验方法,考察巴戟天低聚糖部位及其主要有效成分巴戟甲素的在体肠吸收机制、对肝脏中CYP3A4酶代谢的影响,以期为巴戟天低聚糖类成分的口服制剂研究和开发提供科学依据,并为其药代动力学和药效学的进一步研究奠定基础。采用拟阿尔海茨默（AD）动物模型,探讨巴戟天低聚糖部位及其主要有效成分巴戟甲素的抗AD药效及作用机制研究,为其抗AD新药研究与开发提供研究基础。方法:1巴戟天低聚糖有效部位质控研究采用亲水作用色谱-蒸发光散射检测法建立巴戟天中蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素等5种低聚糖的含量测定方法。采用正交试验法优选巴戟天低聚糖的提取工艺,以巴戟天低聚糖类提取物的出膏率、低聚糖含量以及其主要的活性成分巴戟甲素、耐斯糖为考察指标,进行多指标综合评价分析,优选出最佳提取工艺采用活性炭与D-900离子交换树脂柱层析结合溶剂法对巴戟天低聚糖提取物进行纯化,以HPLC-UV-ELSD、UV、LC-MS等方法检测蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素、低聚糖等指标的含量及纯度。2巴戟天低聚糖的药代动力学研究采用大鼠体肠单向灌流法研究巴戟天低聚糖部位及其主要有效成分巴戟甲素在大鼠肠道中的吸收转运机制,考察蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖和巴戟甲素等5种低聚糖类成分的大鼠肠吸收特点,确定各成分的最佳吸收部位,并考察了 P-gp对巴戟天低聚糖类成分吸收的影响。利用β-D-呋喃果糖苷酶对巴戟甲素进行水解,确定巴戟甲素是否β-D-呋喃果糖苷酶的底物,同时确定巴戟甲素的酶水解产物,并初步研究其酶促反应动力学。以肝脏CYP3A4酶的探针底物氨苯砜,考察不同剂量巴戟天低聚糖提取物及其主要活性成份巴戟甲素对大鼠肝脏CYP3A4活性的影响,以预测其联合应用CYP3A4亚型酶代谢的药物时发生药物相互作用的可能性。3巴戟天低聚糖对AD模型大鼠的影响采用D-半乳糖联合Aβ 25-35制备拟阿尔海茨默大鼠模型,连续给予巴戟天提取物（BT）、巴戟天低聚糖部位（BD）、巴戟甲素（BJ）28 d后,采用Morris水迷宫进行空间学习记忆能力检测,考察给药前后对AD模型大鼠的体重和脏器系数等的影响;采用试剂盒酶-标仪法测定AD大鼠脑海马区及皮质区中超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽还原酶（GSH-Px）等氧化指标,以及乙酰胆碱（Ach）、乙酰胆碱酯酶（TchE）、Na+/K+-ATPase、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）、NO、NOS等指标的含量;采用HPLC-ECD法检测AD大鼠脑海马区及皮质区中多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5-羟色胺（5-HT）等单胺类神经递质水平,及其相关代谢产物5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、高香草酸（HVA）、3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、左旋多巴（L-DOPA）的含量;采用免疫蛋白印迹法（Westernblot）考察BJ、BD、BT对AD模型大鼠海马区中APP、Tau、Caspase-3、SYP蛋白表达的影响。结果:1巴戟天低聚糖有效部位质控研究巴戟天中蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素等5种低聚糖分别在2.128～21.28 μ g（r= 0.9993）,1.864～18.64 μ g（r=0.9996）,1.92～19.2 μ g（r=0.9998）,1.912～19.12 μ g（r=0.9995）,2.368～23.68 u g（r=0.9994）线性关系良好,其回收率在92.81%～102.8%（n=6）之间。不同产地巴戟天药材含量测定结果显示,蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素的含量分别在 1.25%～6.07%、0.57%～6.06%、1.61%～6.82%、2.41%～7.71%、3.84%～10.10%之间。巴戟天低聚糖的提取工艺研究中各因素对出膏率、低聚糖、巴戟甲素及耐斯糖提取率的影响程度依次为:溶剂中乙醇体积分数>提取时间>液固比>提取次数。各因素对实验结果均无显着性影响。从工业生产提高生产效率的角度出发,优选出的最佳工艺条件为A2B1C2D2,即用15倍量的40%乙醇,提取2次,每次1 h。巴戟天低聚糖部位纯化后各指标成分含量均有显着提高,纯化工艺重现性良好。2巴戟天低聚糖的药代动力学研究巴戟甲素在大鼠体肠单向灌流研究结果表明巴戟甲素为全肠道吸收的药物,各肠段存在吸收差异,其吸收速率按十二指肠、空肠、回肠和结肠的顺序依次下降。十二指肠、空肠、回肠和结肠的药物累积吸收量随灌流液药物浓度的增加而近似线性地增加,但吸收速率常数基本不变,表明巴戟甲素在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收以被动扩散方式为主,其吸收动力学符合一级过程。P-gp抑制剂对巴戟甲素肠吸收的影响考察结果表明P-gp对巴戟甲素有肠道外排作用,可减少其肠吸收,说明巴戟甲素可能是P-gp的底物。巴戟甲素酶水解研究确定了巴戟甲素为β-D-呋喃果糖苷酶的底物,其水解后得到的单一产物为β-D-呋喃果糖。初步得到该酶促反应的Michaelis-Menten方程为:rp=0.9565Cs/（12.8761+Cs）,其中Km=12.8761mg·mL-1,Vm=0.9565mg·mL-1·h-1。巴戟天提取物中5种低聚糖成分在大鼠全肠段的吸收速率（Ka）均无显着差异（P>0.05）,其药物累积吸收量随灌流液药物浓度的增加而近似线性地增加,说明药物不存在自身浓度抑制现象,提示巴戟天提取物中5种低聚糖成分的在体肠吸收机制均以被动扩散为主,其吸收动力学符合一级过程。提取物中各成分的吸收速率依次为:巴戟甲素≥蔗糖>蔗果三糖>耐斯糖>1F-果呋喃糖基耐斯糖。对不同肠段中各成分的吸收进行比较,总体方差分析结果显示各成分的吸收具有差异性（P<0.05）。P-gp抑制剂对巴戟天提取物肠吸收的影响考察结果显示盐酸维拉帕米可显着增加蔗糖与巴戟甲素的吸收量,这种促吸收效果是通过抑制P-gp的外排引起的,由此提示蔗糖与巴戟甲素可能是P-gp的底物。3巴戟天低聚糖对AD模型大鼠的影响灌胃给药28 d后,水迷宫实验结果显示AD模型组定位航行潜伏期明显长于空白组,而各给药组明显得到改善。空间探索实验结果显示各给药组在原平台象限游泳距离与总距离之比均有所上升而穿越原平台的次数也显着增加。脏器系数测量结果显示,模型组脑、脾、睾丸等脏器系数比正常对照组都降低,而给予BJ、BD、BT治疗后,BD、BT对各脏器系数均有增加的作用,BJ对脑、肝、睾丸等脏器系数有增加的作用。BJ与BD可以提高AD模型大鼠海马组织及皮质层中SOD、Na+/K+-ATP、GABA,降低MDA、TChE的活性,从而达到保护神经系统的作用。采用大鼠双侧海马区注射A β 25-35并联合长期腹腔注射D-半乳糖可致大鼠脑海马及皮质层的神经递质含量明显降低,而分别给予BJ、BD、BT治疗后,均可显着提高大鼠脑海马及皮质层中NE、DA、5-HT的含量,从而达到增强学习记忆能力的效果。同时还不同程度的提高DA/HVA、NE/E、5-HT/5-HIAA的比值,说明BJ、BD、BT可抑制相关的代谢路径。采用大鼠双侧海马区注射A β 25-35并联合长期腹腔注射D-半乳糖可致大鼠脑海马中APP、Tau、Caspase-3蛋白表达水平上升,SYP蛋白表达水平明显降低,而分别给予BJ、BD、BT治疗后,各蛋白表达水平异常的情况均有所缓解,说明巴戟天低聚糖类成分改善AD大鼠学习记忆障碍的作用机制,与上调SYP、降低APP、Tau、Caspase-3的表达有关。结论:1巴戟天低聚糖有效部位质控研究建立的巴戟天低聚糖有效成分含量测定方法简单、准确,具有良好的重复性,为有效评价巴戟天药材的质量提供了分析方法。根据中国药典规定并结合本研究结果,在此对巴戟天药材中低聚糖的含量限度提出初步的建议:按巴戟天药材干燥品计算,耐斯糖的含量不得少于2%,巴戟甲素的含量不得少于4%,蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素的总含量不得少于14%。优选出的巴戟天低聚糖提取工艺各指标性成分含量较高,工艺稳定、合理、可行,为工业化生产提供参考。巴戟天低聚糖部位纯化工艺的重现性良好,所制得的巴戟天低聚糖部位纯度高,已知成分含量大于50%,可用于开发国家规定的五类新药。2巴戟天低聚糖的药代动力学研究巴戟甲素在整个肠段吸收良好,属于高渗透性药物,在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收机制以被动扩散方式为主。本研究将为巴戟甲素设计成口服缓控释制剂提供了生物学依据。β-D-呋喃果糖苷酶与巴戟甲素亲和力较强,葡萄糖对巴戟甲素的酶解具有一定的促进作用,提示机体内的葡萄糖对巴戟甲素的代谢也可能有一定的促进作用从而降低巴戟甲素的生物利用度。本研究将为巴戟甲素的药物代谢动力学研究及其新药的开发提供理论参考。巴戟天低聚糖在全肠段吸收中,其吸收速率依次为二糖>三糖>四糖>五糖,推测可能与各成分的分子大小有关。在本实验条件中,各成分在不同肠段中的Papp均大于0.072 cm·h-1,说明各低聚糖成分在整个肠段中吸收良好,属于高渗透性药物,主要与各成分均具有较强的亲水性从而易于在肠道中吸收扩散进入体内有关。3巴戟天低聚糖对AD模型大鼠的影响实验采用大鼠双侧海马区注射Aβ 25-35并联合长期腹腔注射D-半乳糖,诱发拟AD动物模型。从行为学、氧化应激、胆碱能系统、能量代谢、氨基酸、神经递质和蛋白表达水平等方面,观察了巴戟天低聚糖对AD模型大鼠的影响,实验结果显示巴戟天低聚糖可以改善AD大鼠学习记忆障碍,其作用机制与以下三方面有关:（1）提高SOD、Na+/K+-ATP、GABA,降低MDA、TChE的活性;（2）提高神经递质水平;（3）上调SYP,降低APP、Tau、Caspase-3等蛋白的表达水平。
李熙[8]（2012）在《p38MAPK信号通路在逆灸防治阿尔茨海默病模型大鼠中的作用研究》文中指出目的阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）,是一种严重危害中老年人身心健康的中枢神经系统退行性疾病,临床表现为进行性的认知功能障碍、学习记忆能力减退、情感障碍、行为失常,最终导致生活自理能力丧失。在老年人群中,AD已成为继肿瘤、心脏病和中风之后的第四位死亡原因,给家庭及社会带来沉重的负担和痛苦。随着我国入口的老龄化,AD的发病呈现出较快的增长趋势,业已成为严重的公共健康问题。由于AD病程较长,病情较重,中晚期AD的治疗效果不佳且治疗费用高,因此研究AD的侧重点应转向早期诊断和早期干预。本课题将聚集态A β25-35立体定向注入大鼠双侧海马造成AD模型,通过逆灸“百会”、“肾俞”、“足三里”进行防治,研究p38MAPK信号通路介导的炎症反应在逆灸防治AD中的作用机制。方法健康雄性SD大鼠（15月龄）50只,体重350-480g,先进行Y型水迷宫筛选,淘汰反应过于迟钝或特别敏感的大鼠,将合格大鼠按随机数字表法分为4组,正常组、假手术组、模型组、逆灸组,每组10只。逆灸组处理方法是对正常大鼠先施于艾灸刺激。于正常大鼠“百会”、“肾俞”、“足三里”穴上方2～3cm处悬灸（“肾俞”、“足三里”左右隔日交替使用）,每穴持续5分钟,每日1次,6日为1疗程,疗程间休息1日,共3个疗程。施灸结束当日即开始给大鼠双侧海马区注射A β25-35建立AD模型,造模后次日继续艾灸治疗1疗程。Morris水迷宫行为学试验测定其学习记忆能力,透射电镜观察逆灸对AD模型大鼠海马CA1区神经细胞超微结构的影响,免疫组化SP法观察逆灸对AD模型大鼠海马区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（P-p38MAPK）、炎症介质环氧合酶2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）表达情况的影响。全部数据输入计算机,用SPSS13.0统计软件包进行处理,实验结果以（χ±s）表示。结果（1）从Morris水迷宫试验中我们发现,各组大鼠逃避潜伏期随着游泳天数的增加而逐渐缩短,说明各组大鼠在5天游泳训练中,对于寻找平台均有一定的学习记忆能力,但各组之间学习记忆能力有很大差异。A β25-35聚集液立体定向注入大鼠双侧海马后,模型组大鼠5天平均潜伏期及后3天平均潜伏期均较其他组明显延长,穿过原平台位置的次数比其他各组明显减少。定位航行试验及空间探索试验中,模型组大鼠象限百分比亦明显比其他各组少,与正常组及假手术组比较,有极显着性差异（P<0.01）,说明模型组大鼠学习记忆能力显着降低,双侧海马一次性注射A β25-35制备AD模型成功。与模型组比较,逆灸组大鼠5天平均潜伏期和后3天平均潜伏期均明显缩短,穿过原平台位置的次数明显增多,在实验平台象限的游泳距离占总距离百分比明显增高,经统计学分析,有极显着性差异（P<0.01）。说明逆灸是预防学习记忆障碍疾病的有效方法,逆灸对AD模型大鼠的学习记忆障碍具有明显改善作用。（2）透射电镜观察结果显示,正常组和假手术组大鼠海马CA1区神经细胞胞膜完整,细胞浆和细胞器电子密度均匀,线粒体结构清楚,线粒体嵴清晰可见,内质网排列整齐,未见明显病变。模型组大鼠海马CA1区神经元出现程度不等的退行性改变,神经元体积缩小,一些固缩神经元散在分布于变性肿胀的神经元之间,细胞浆和细胞器密度增高,细胞核形态不规则,细胞器结构破坏,显示不清,内质网扩张,脂褐素沉积增多,线粒体数目减少,线粒体肿胀,基质清淡、有空泡,甚至见大量线粒体嵴呈畸形样改变或缺失。逆灸组大鼠海马CA1区神经细胞水肿减轻,线粒体、高尔基体、核糖体较模型组明显增多。细胞器可见内质网轻度扩张,线粒体轻度肿胀。逆灸对AD模型大鼠海马神经细胞的超微结构退变有明显改善作用。（3）模型组大鼠海马区P-p38MAPK、COX-2、PGE2的表达明显增加,表现为阳性神经元平均灰度值明显下降,与正常组及假手术组比较,有极显着性差异（P<0.01）。逆灸组大鼠海马区P-p38MAPK、COX-2、PGE2的表达明显减少,表现为阳性神经元平均灰度值明显上升,与模型组比较,有极显着性差异（p<0.01）。结论海马区注射A β25-35可以激活p38MAPK信号转导途径,p38MAPK的激活导致炎症介质COX-2、PGE2的上调,从而诱导AD大鼠脑内神经元的退行性改变,引起大鼠学习记忆障碍。逆灸治疗可引起P-p38MAPK、COX-2、PGE2在海马区的表达明显减少,可抑制注射A β导致的大鼠海马区神经细胞损伤变性,促进神经细胞的修复,逆灸对AD模型大鼠海马神经细胞的超微结构退变有明显改善作用。逆灸防治AD的作用机制,可能是通过抑制p38MAPK信号通路,减轻炎症介质COX-2、PGE2的表达,从而发挥对AD大鼠脑内神经元的保护和促进修复作用,进而改善A β所致的大鼠学习记忆障碍。
聂志玲[9]（2011）在《寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠神经元突触损伤的保护作用及机制研究》文中认为背景和目的阿尔茨海默病（Alzheimer Disease, AD）是一种原因不明的进行性变性疾病,以记忆和其他认知功能衰退直至发展为严重痴呆为特征。研究发现：阿尔茨海默病患者的大脑内不但存在有突触数目减少、结构异常、而且包括功能蛋白（突触后致密区蛋白PSD-95）以及对突触存活起重要作用的神经生长因子NGF及其受体TrKA、细胞外调节蛋白激酶ERK都有不同程度的表达异常。迄今为止,尚无对突触保护特别有效的治疗和预防药物。因此,加强对AD突触的保护研究具有一定的理论意义。祖国医学认为中药的干预对阿尔茨海默病的治疗是有效的；根据补肾健脑,活血祛瘀,化痰开窍的治法组方的寿尔智胶囊,用于治疗阿尔茨海默病取得了确切的疗效。前期的研究显示寿尔智胶囊在对AD模型小鼠学习和记忆的改善中有多方面的作用机理,但对其在突触保护方面有无作用未有研究。本研究通过经脑立体定位仪向SD大鼠海马区注射凝聚态Aβ25-35,建立阿尔茨海默病大鼠模型,应用具有补肾健脑,活血祛瘀,化痰开窍作用的中药寿尔智胶囊进行治疗,观察寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠行为学、海马突触超微结构、海马突触后致密区蛋白PSD-95、神经生长因子NGF及其受体TrKA、细胞外调节蛋白激酶ERK1、ERK2基因及蛋白的表达以及寿尔智胶囊对它们的影响,探讨突触损伤与AD的发病两者之间的关系以及寿尔智胶囊在突触保护方面的作用机制。方法将实验动物随机分为4组：假手术组、模型组、寿尔智组、盐酸多奈哌齐组,每组10只。采用经脑立体定位仪向SD大鼠海马CA1区注射凝聚态Aβ25-35,建立阿尔茨海默病大鼠模型。造模成功后,治疗组分别给予盐酸多奈哌齐和寿尔智胶囊进行四周的治疗,同时假手术组和模型组给予等体积的生理盐水。四周后,运用Morris水迷宫测试检测大鼠的学习和记忆能力；学习和记忆能力测试结束,行HE染色对大鼠海马CA1区神经元形态进行观察；用透射电子显微镜对大鼠海马CA1区的突触超微结构进行观察；并用图像分析仪测量和分析大鼠海马CA1区突触界面结构参数；免疫组化法测定海马CA1区突触后致密区蛋白PSD-95、神经生长因子NGF及其受体TrKA、细胞外调节蛋白激酶ERK1、ERK2的表达；RT-PCR测定海马组织PSD-95 mRNA, NGF mRNA、TrKA mRNA、ERK1 mRNA、ERK2 mRNA的表达,并观察寿尔智胶囊对上述指标的影响。结果1.寿尔智胶囊能明显改善AD模型大鼠的学习和记忆能力：定位航行试验中,与假手术组比较,模型组平均逃避潜伏期明显延长,差异具有显着性（P<0.01）；盐酸多奈哌齐组和寿尔智组大鼠的平均逃避潜伏期较模型组缩短,差异具有显着性（P<0.01）,但是与假手术组比较,差异不显着（P>0.05）；且寿尔智组与盐酸多奈哌齐组相比无显着性差异（P>0.05）。空间探索试验中,与假手术组比较,模型组原平台象限活动时间明显缩短,差异具有显着性（P<0.01）；寿尔智组和盐酸多奈哌齐组与模型组比较,原平台象限活动时间均明显延长,差异具有显着性（P<0.05）,与假手术组比较,差异不显着（P>0.05）；且寿尔智组与盐酸多奈哌齐组相比无显着性差异（P>0.05）。2.与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区细胞排列不整齐,数目明显减少,突触结构损伤较明显；与模型组相比,盐酸多奈呱齐组和寿尔智组大鼠海马CA1区细胞排列较整齐,数目明显增多,突触结构损伤较轻。3.与假手术组相比,模型组大鼠海马CA1区突触后致密区厚度变薄,突触间隙宽度明显增大,差异具有显着性（P<0.01）；而盐酸多奈呱齐组和寿尔智组能逆转上述病理性变化：使海马CA1区突触后致密区厚度显着变厚,突触间隙宽度明显减小,差异具有显着性（P<0.01）；且寿尔智组与盐酸多奈哌齐组相比无显着性差异（P>0.05）。4.与假手术组相比,模型组大鼠海马组织CA1区PSD-95、TrKA、ERK1、ERK2表达明显减少（P<0.01）；盐酸多奈呱齐组和寿尔智组大鼠海马组织PSD-95、TrKA、ERK1、ERK2表达较模型组增加（P<0.05或P<0.01）,但低于假手术组的表达（P<0.05或P<0.01）；盐酸多奈呱齐组与寿尔智组之间比较差异无显着性（P>0.05）。且NGF在各组海马CA1区中的表达变化无显着性差异（P>0.05）。5.与假手术组相比,模型组大鼠海马组织区PSD-95mRNA、TrKA mRNA、ERK1mRNA、ERK2 mRNA表达明显减少（P<0.01）；盐酸多奈呱齐组和寿尔智组大鼠海马组织PSD-95 mRNA、TrKA mRNA、ERK1 mRNA、ERK2 mRNA表达较模型组增加（P<0.05或P<0.01）,但低于假手术组的表达（P<0.05或P<0.01）；盐酸多奈呱齐组与寿尔智组之间比较差异无显着性（P>0.05）。且NGFmRNA在各组海马组织中的表达变化无显着性差异（p>0.05）。结论1.向大鼠海马内注射Aβ25-35建立的AD模型可模拟AD患者临床表现和部分病理特征,且重复性好,是AD实验研究较理想的模型。2.引起海马突触结构损伤、海马PSD-95、TrKA、ERK1、ERK2表达明显减少,神经元存活信号途径障碍可能是Aβ25-35导致AD模型大鼠突触损伤的重要机制。3.逆转海马CA1区突触结构损伤：使触后致密区厚度显着变厚,突触间隙宽度显着减小可能是寿尔智胶囊保护AD模型大鼠突触结构的重要机制。4.促使海马PSD95、TrKA、ERK1、ERK2的表达上调,激活神经元存活信号途径,可能是寿尔智胶囊保护AD大鼠突触功能的重要机制。
李志强[10]（2010）在《β-细辛醚对AD大鼠学习记忆的影响及血管保护机制研究》文中认为目的：建立Wista大鼠阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）模型,观察AD大鼠模型学习记忆功能及血管损伤和保护性因素的变化,探讨石菖蒲活性成分β-细辛醚化痰开窍益智防治AD的药效学基础及其血管保护机制,为AD的防治提供新的思路。方法：应用D-半乳糖（D-galactose, D-gal）联合三氯化铝（Aluminium trichloride, ALCL3）腹腔注射造成AD模型；皮下注射β-细辛醚进行治疗；应用Morris水迷宫进行行为学测试；应用激光多普勒血流仪检测脑顶叶局部脑血流量,血液流变仪检测血液流变学指标,全自动生化分析仪检测血脂四项,比色法检测皮层乳酸（Lactic acid, LA）、丙酮酸（Pyruvic acid, PA）和Na-K-ATP酶活性,real-time RT-PCR的方法检测大鼠海马ET-1、eNOS和APP mRNA的表达；应用SPSS15.0软件对实验数据进行统计分析。结果：1.模型组大鼠定向航行试验逃避潜伏期,空间探索试验穿越平台次数和第一次穿越平台时间,脑顶叶局部脑血流量和红细胞浓度、全血粘度、血浆粘度、红细胞压积、红细胞电泳时间和纤维蛋白原等血液流变学指标、甘油三酯（Triglyeride,TG）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C）和高密度脂蛋白（High density lipoprotein-cholesterol, HDL-C）、皮层LA含量、PA含量与Na-K-ATP酶活性、海马ET-1和eNOS mRNA的表达等各项实验结果与空白组比较,P<0.05；海马APP mRNA的表达与空白组比较,P>0.05,但表达水平较高；2.与尼莫地平组相比,β-细辛醚低、中、高剂量组AD大鼠定向航行试验逃避潜伏期较短,P<0.05；与石菖蒲组相比,β-细辛醚低、中、高剂量组AD大鼠定向航行试验逃避潜伏期无差异,P>0.05；3.与模型组相比,β-细辛醚高剂量组AD大鼠定向航行试验逃避潜伏期较短,在平台象限穿越次数较多,脑顶叶局部脑血流量和红细胞浓度较高,全血粘度、血浆粘度、红细胞压积和纤维蛋白原等指标降低,红细胞电泳时间缩短,总胆固醇（Total cholesterol, TC）降低,LDL-C降低,皮层PA降低、Na-K-ATP酶活性升高,ET-1 mRNA表达降低,P<0.05,APP和eNOS mRNA的表达与模型组比较,P>0.05,但表达水平较低；与空白组比较,β-细辛醚高剂量组AD大鼠LDL-C水平无差异,P>0.05；4.与模型组相比,β-细辛醚中剂量组AD大鼠定向航行试验逃避潜伏期较短,全血粘度、红细胞压积和纤维蛋白原等指标降低,红细胞电泳时间缩短,TC降低,LDL-C降低,皮层PA降低,P<0.05；中剂量组AD大鼠LDL-C与空白组大鼠比较,P<0.05；5.与模型组相比,β-细辛醚低剂量组AD大鼠定向航行试验逃避潜伏期较短,全血粘度、红细胞压积和纤维蛋白原等指标降低,红细胞电泳时间缩短,LDL-C降低,皮层PA降低,P<0.05；低剂量组AD大鼠LDL-C与空白组大鼠比较,P<0.05；6.与模型组相比,尼莫地平组AD大鼠全血粘度、红细胞压积和纤维蛋白原等指标降低,红细胞电泳时间缩短,皮层PA降低,P<0.05；7.与模型组相比,石菖蒲组AD大鼠全血粘度、红细胞压积和纤维蛋白原等指标降低,红细胞电泳时间缩短,TG和LDL-C降低,P<0.05；石菖蒲组AD大鼠LDL-C与空白组大鼠比较,P<0.05。结论：1.D-GAL （60mg/kg/d）联合ALCL3 （10mg/kg/d）腹腔注射造成的AD大鼠模型存在学习能力和记忆能力的障碍,存在多种血管性危险因素；脑代谢低下；海马ET-1和eNOSmRNA表达水平升高,APP mRNA表达水平也有升高的趋势,是研究药物血管保护作用和机制的理想AD动物模型；2.β-细辛醚高剂量可以全面改善AD大鼠学习和记忆能力；β-细辛醚中剂量（50mg/kg/d）和低剂量（25mg/kg/d）可以改善AD大鼠的学习能力；3.β-细辛醚高剂量可以改善AD大鼠顶叶皮层局部脑血流量、红细胞浓度的下降；4.β-细辛醚低剂量、中剂量、高剂量组、尼莫地平和石菖蒲均可以不同程度的改善AD大鼠血液流变学,以β-细辛醚高剂量最好；5.β-细辛醚低中高剂量均可以不同程度的降低AD大鼠的TC和LDL-C,β-细辛醚高剂量效果最好；石菖蒲可以降低AD大鼠的TG和LDL-C水平,在降低TG上优于β-细辛醚,在降低LDL-C上差于β-细辛醚高剂量；6.β-细辛醚低中高剂量和尼莫地平可不同程度的改善脑代谢,β-细辛醚高剂量效果最好；7.β-细辛醚具有化痰开窍益智防治痴呆的功效；8.β-细辛醚高剂量可以抑制AD大鼠ET-1 mRNA表达水平的升高,对AD大鼠海马eNOS和APP mRNA表达水平的升高有对抗趋势,可能是其防治AD的血管保护机制之一。
二、补肾活血化痰方对AD大鼠学习记忆功能及脑神经元型一氧化氮合酶的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、补肾活血化痰方对AD大鼠学习记忆功能及脑神经元型一氧化氮合酶的影响（论文提纲范文）
（1）基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 线粒体能量代谢关键蛋白在认知障碍中的作用机制 |
| 1 能量代谢相关通路在认知障碍中的作用 |
| 2 线粒体能量代谢相关的关键蛋白在认知障碍中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述二 基于中医“虚、瘀、毒”病机探讨能量代谢异常和血管性认知障碍的相互关系 |
| 1 中医“虚、瘀、毒”与血管性认知障碍的关系 |
| 2 中医“虚、瘀、毒”与能量代谢障碍的关系 |
| 3 脑的能量代谢与血管性认知障碍的关系 |
| 4 改善线粒体能量代谢治疗血管性认知障碍的中药复方研究 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 参麻益智方的提取方法和主要化学成分分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 参麻益智方对慢性脑缺血致血管性认知障碍大鼠学习记忆能力的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 参麻益智方对慢性脑缺血致认知障碍模型大鼠脑组织线粒体障碍相关蛋白的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 参麻益智方的组方特点和前期研究成果 |
| 2 慢性脑低灌注致血管性认知功能障碍大鼠模型 |
| 3 参麻益智方改善血管性认知障碍大鼠学习记忆功能 |
| 4 参麻益智方对血管性认知障碍大鼠线粒体数量和结构的影响 |
| 5 参麻益智方对线粒体关键蛋白能量代谢的影响 |
| 6 线粒体能量代谢的中医认识 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附件 |
（2）从调控小胶质细胞极化研究益肾化浊方改善阿尔茨海默病神经炎症反应的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 YHD对SAMP8小鼠学习记忆能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 平均游泳速度 |
| 2.2 逃避潜伏期时间 |
| 2.3 穿越平台次数 |
| 2.4 初始角 |
| 3 小结 |
| 实验二 YHD对SAMP8小鼠海马CA1区神经元及MG极化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 尼氏染色结果 |
| 2.2 免疫荧光双标结果 |
| 3 小结 |
| 实验三 YHD对SAMP8小鼠海马MG极化与神经炎症反应中关键靶点的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 Western blot结果 |
| 2.2 ELISA结果 |
| 2.3 q PCR结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 益肾化浊法治疗AD切实可行 |
| 2 SAMP8小鼠是契合本研究的理想模型 |
| 3 YHD可有效改善SAMP8小鼠学习记忆能力 |
| 4 YHD可有效减少SAMP8小鼠海马神经元缺失 |
| 5 YHD可调控MG极化向M2型转化 |
| 6 YHD可能通过激活PU.1/TREM2/PPARγ通路,抑制NF-κB表达,促进MG向M2型极化,减轻神经炎症反应 |
| 7 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述中药调控小胶质细胞功能治疗AD的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）健脾益智法调节AD大鼠脑内尿素代谢的作用机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学对AD主要症状的认识 |
| 1.1 衰老 |
| 1.2 记忆障碍 |
| 1.3 认知障碍 |
| 1.4 失语 |
| 1.5 精神症状 |
| 2. 中医学对AD病位的认识 |
| 2.1 脑的主要生理功能 |
| 2.2 脑的生理病理特点 |
| 2.3 脑与五脏的关系 |
| 2.4 五脏与AD的关系 |
| 3. 健脾益智法调治AD |
| 3.1 理论基础 |
| 3.2 实验基础 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 健脾益智汤对Aβ1-40所致AD大鼠行为学的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物制备与给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 AD模型大鼠复制 |
| 2.3 Morris水迷宫实验 |
| 2.4 统计分析方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 Morris水迷宫定位航行实验结果 |
| 3.2 Morris水迷宫空间探索实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 动物模型的选择 |
| 4.2 Morris水迷宫检测 |
| 4.3 干预方法 |
| 实验二 健脾益智汤对Aβ1-40所致AD大鼠脑内尿素含量的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物制备与给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 脲酶法检测各组大鼠脑内尿素含量 |
| 2.4 统计方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三 健脾益智汤对Aβ1-40所致AD大鼠脑内SLC14A1基因表达情况及UTB蛋白含量的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物制备与给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 实时荧光定量PCR法检测各组大鼠大脑中SLC14A1基因相对表达 |
| 2.4 western-blot法检测大鼠脑内UTB含量 |
| 2.5 统计方法 |
| 3. 结果 |
| 3.1 实时荧光定量PCR检测SLC14A1基因mRNA表达情况 |
| 3.2 Western bolt检测各组大鼠脑内UTB蛋白含量 |
| 4. 讨论 |
| 实验四 健脾益智汤对Aβ1-40所致AD大鼠脑内CPS、OTC、ASS、ASL、ARG表达的影响 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物制备与给药方法 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 标本制备 |
| 2.3 ELISA法检测大鼠脑内CPS、OTC、ASS、ASL、ARG酶 |
| 3. 结果 |
| 3.1 各组大鼠脑内ARG含量 |
| 3.2 各组大鼠脑内ASS含量 |
| 3.3 各组大鼠脑内ASL含量 |
| 4. 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
（4）基于PI3K/Akt信号通路探讨益髓解毒法对血管性痴呆大鼠作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 英文缩略语 引言 文献综述 实验研究 |
| 第一章 益髓解毒法对血管性痴呆大鼠行为学的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第二章 益髓解毒法对血管性痴呆大鼠海马组织形态学的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第三章 益髓解毒法对血管性痴呆大鼠海马组织细胞损伤及凋亡的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第四章 益髓解毒法对血管性痴呆大鼠海马PI3K/Akt信号通路的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 第五章 “髓虚毒损”中风病机思想对VD益髓解毒治疗大法的指导 |
| 1.课题研究的理论背景 |
| 2.髓虚毒损病机关键对血管性痴呆的理论指导 |
| 3.益髓解毒法治疗VD的理论依据及组方分析 |
| 4.益髓解毒法与VD细胞凋亡机制的关联分析 |
| 5.课题研究不足 结论 本文创新点 参考文献 致谢 在学期间主要研究成果 个人简介 |
（5）参附注射液治疗血管性痴呆的作用及分子机制的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 参附注射液治疗VD模型小鼠的作用及机制 |
| 前言 |
| 第一章 参附注射液对VD模型小鼠的治疗作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 主要溶液与试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物模型制作 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 行为学检测 |
| 2.4 样本采集 |
| 2.5 大脑病理切片 |
| 2.6 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 体重 |
| 3.2 水迷宫 |
| 3.3 大脑病理切片 |
| 4 讨论 |
| 第二章 参附注射液经5-LO/LTs途径治疗VD模型小鼠的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 主要溶液与试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物模型制作 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 小鼠血清LTB4和CysLTs的测定 |
| 2.4 qPCR检测SFI对VD小鼠mRNA表达的影响 |
| 2.5 蛋白印迹法检测SFI对VD小鼠蛋白表达的影响 |
| 2.6 组织免疫组化 |
| 2.7 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SFI对VD小鼠血清LTB4和CysLTs含量的影响 |
| 3.2 SFI对VD小鼠5-LO表达的影响 |
| 3.3 SFI对VD小鼠LTA4H表达的影响 |
| 3.4 SFI对VD小鼠LTC4S表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第三章 参附注射液经NOS/NO途径治疗VD模型小鼠的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 1.4 主要溶液与试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物模型制作 |
| 2.2 动物分组及给药 |
| 2.3 Griess法检测小鼠血清NO含量检测 |
| 2.4 qPCR检测SFI对VD小鼠mRNA表达的影响 |
| 2.5 蛋白印迹 |
| 2.6 组织免疫组化 |
| 2.7 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SFI对VD小鼠血清NO含量的影响 |
| 3.2 SFI对VD小鼠iNOS表达的影响 |
| 3.3 SFI对VD小鼠nNOS表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 第二部分 参附注射液对氧糖剥夺损伤PC12细胞的保护作用及其机制 |
| 前言 |
| 第一章 参附注射液对氧糖剥夺损伤PC12细胞的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 PC12细胞 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞氧糖剥夺(OGD)损伤PC12细胞模型的建立(MTT法) |
| 2.3 参附注射液对OGD损伤PC12细胞活性的影响(MTT法) |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 OGD损伤对PC12细胞增殖的影响 |
| 3.2 参附注射液对OGD损伤PC12细胞活性的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二章 参附注射液经5-LO/LTs途径对氧糖剥夺损伤PC12细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 PC12细胞 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要溶液与试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 ELISA检测SFI对OGD损伤PC12细胞培养基上清中LTB4和CysLTs含量的影响 |
| 2.2 qPCR检测SFI对OGD损伤PC12细胞mRNA的影响 |
| 2.3 蛋白印迹法检测SFI对OGD损伤PC12细胞蛋白表达的影响 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SFI对OGD损伤PC12细胞培养基上清中LTB4和CysLTs含量的影响 |
| 3.2 SFI对OGD损伤PC12细胞中5-LO表达的影响 |
| 3.3 SFI对OGD损伤PC12细胞中LTA4H表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第三章 参附注射液经NOS/NO途径对氧糖剥夺损伤PC12细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 PC12细胞 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要溶液与试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 Griess法检测SFI对OGD损伤PC12细胞培养基上清中NO含量的影响 |
| 2.2 qPCR检测SFI对OGD损伤PC12细胞mRNA的影响 |
| 2.3 蛋白印迹法检测SFI对OGD损伤PC12细胞蛋白表达的影响 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SFI对OGD损伤PC12细胞培养基上清中NO含量的影响 |
| 3.2 SFI对OGD损伤PC12细胞中iNOS表达的影响 |
| 3.3 SFI对OGD损伤PC12细胞中nNOS表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 血管性痴呆的中医药治疗新进展 |
| 参考文献 |
（6）艾灸对Alzheimer病模型大鼠JNK信号通路及细胞凋亡相关因子影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 艾灸对阿尔茨海默病模型大鼠行为学影响的研究 |
| 参考文献 |
| 实验二 艾灸对阿尔茨海默病模型大鼠海马形态学影响的研究 |
| 参考文献 |
| 实验三 艾灸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区 c-jun 氨基末端激酶及 Bcl-2、Bax、Caspase-3 影响的研究 |
| 参考文献 |
| 讨论 |
| 一、中医学对老年性痴呆的认识 |
| 二、西医学对阿尔茨海默病的认识 |
| 三、动物模型的选择与评价 |
| 四、穴位选择依据 |
| 五、艾灸治疗阿尔茨海默病的作用机制研究 |
| 六、问题与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治老年性痴呆的临床研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治阿尔茨海默病的实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（7）巴戟天低聚糖益脑作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 文献研究部分 |
| 第一章 巴戟天研究进展 |
| 第一节 巴戟天药材研究进展 |
| 第二节 巴戟天低聚糖研究进展 |
| 第三节 巴戟甲素研究进展 |
| 第二章 神经退行性疾病研究现状 |
| 第一节 神经退行性疾病发病机制研究进展 |
| 第二节 阿尔茨海默病研究进展 |
| 第三节 AD动物模型研究进展 |
| 第三章 研究思路与评价 |
| 实验研究部分 |
| 第一章 巴戟天低聚糖有效部位质控研究 |
| 第一节 巴戟天低聚糖类有效成份含量测定研究 |
| 第二节 巴戟天低聚糖提取工艺研究 |
| 第三节 巴戟天低聚糖部位纯化工艺研究 |
| 第二章 巴戟天低聚糖药代动力学初步研究 |
| 第一节 巴戟甲素单向灌流在体肠实验研究 |
| 第二节 巴戟甲素酶水解动力学研究 |
| 第三节 巴戟天低聚糖在体肠吸收机制研究 |
| 第四节 巴戟天低聚糖对大鼠肝脏中CYP3A4的影响 |
| 第三章 巴戟天低聚糖对AD模型大鼠的影响 |
| 第一节 对AD模型大鼠空间学习记忆及相关脏器的影响 |
| 第二节 对AD模型大鼠氧化应激、胆碱能、氨基酸类递质以及其它指标的影响 |
| 第三节 对AD模型大鼠脑组织单胺类神经递质及其相关代谢产物的影响 |
| 第四节 对AD模型大鼠海马脑组织中相关蛋白表达的影响 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读研究生期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（8）p38MAPK信号通路在逆灸防治阿尔茨海默病模型大鼠中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 逆灸对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力影响的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 逆灸对阿尔茨海默病模型大鼠海马CA1区超微结构影响的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 逆灸对阿尔茨海默病模型大鼠海马区p38MAPK信号通路影响的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 讨论 |
| 一、中医学对老年性痴呆的认识 |
| 二、西医学对阿尔茨海默病的认识 |
| 三、动物模型的选择与评价 |
| 四、穴位选择依据 |
| 五、逆灸防治阿尔茨海默病的作用机制研究 |
| 六、问题与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述一 针灸治未病的研究进展 |
| 综述二 针灸治疗阿尔茨海默病的实验研究进展 |
| 致谢 |
（9）寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠神经元突触损伤的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 AD模型大鼠的建立及寿尔智胶囊其行为学及组织学的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 寿尔智胶囊对AD模型大鼠海马PSD-95基因及蛋白表达的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 寿尔智胶囊对AD模型大鼠海马NGF、TrKA基因及蛋白表达的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 寿尔智胶囊对AD模型大鼠海马ERK1、ERK2基因及蛋白表达的作用 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 结语 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）β-细辛醚对AD大鼠学习记忆的影响及血管保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩略词中英文对照表 |
| 目录 |
| 前言 |
| 1 AD的概述 |
| 2 "AD是一种脑血管病"的假说 |
| 3 防治AD药物概述 |
| 4 防治AD中药复方的规律探讨 |
| 5 石菖蒲化痰开窍益智的研究概况 |
| 6 β-细辛醚血管保护及其化痰开窍益智的药理研究 |
| 7 本课题的研究思路和目的 |
| 参考文献 |
| 实验一:β-细辛醚对AD大鼠学习记忆的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 造模方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 学习记忆能力测定 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 定向航行试验结果与分析 |
| 3.2 空间探索试验结果及分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AD动物模型的选择 |
| 4.2 阳性药物的选择 |
| 4.3 造模和治疗组药物对AD大鼠学习记忆影响的比较 |
| 5 本实验结论 |
| 实验二:β-细辛醚对AD大鼠顶叶皮层局部脑血流量的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模方法 |
| 2.2 分组方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 皮层血流量的测定 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 各组大鼠脑顶叶局部脑血流量的比较 |
| 3.2 各组大鼠脑顶叶组织红细胞浓度的比较 |
| 3.3 各组大鼠脑顶叶组织血流速度的比较 |
| 3.4 小结 |
| 4 讨论 |
| 4.1 大脑顶叶皮层局部脑血流量检测对于AD防治具有重要意义 |
| 4.2 局部脑血流量检测方法的选择 |
| 4.3 AD病程中影响局部脑血流量的因素 |
| 5 本实验结论 |
| 实验三:β-细辛醚对AD大鼠血液流变学和血脂四项的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模方法 |
| 2.2 分组方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 血液流变学的测定 |
| 2.5 血脂四项的测定 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 各组大鼠血液流变学指标的比较 |
| 3.2 各组大鼠血清血脂四项的比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AD的血液流变学特点探讨 |
| 4.2 血脂四项与AD的相关性分析 |
| 5 本实验结论 |
| 实验四:β-细辛醚对AD大鼠皮层LA、PA和NA-K-ATP酶的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模方法 |
| 2.2 分组方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 脑皮层LA、PA和Na-K-ATP酶的测定 |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 各组大鼠皮层LA、PA和Na-K-ATP酶活性的比较 |
| 3.2 小结 |
| 4 讨论 |
| 4.1 能量代谢障碍在AD病理机制中的作用 |
| 4.2 β-细辛醚对AD大鼠脑能量代谢的影响 |
| 5 本实验结论 |
| 实验五:β-细辛醚对AD大鼠海马ET-1、ENOS和APP MRNA表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 主要试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模方法 |
| 2.2 分组方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 总RNA提取 |
| 2.6 逆转录反应合成第一链cDNA(RT) |
| 2.7 大鼠海马ET-1、eNOS和APP mRNA的Real-time PCR反应 |
| 2.8 统计方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 荧光定量标准品梯度扩增曲线及标准曲线 |
| 3.2 荧光定量标准品梯度扩增溶解曲线 |
| 3.3 荧光定量标准品梯度扩增产物电泳结果 |
| 3.4 荧光定量标准品梯度扩增产物测序结果 |
| 3.5 各组大鼠海马ET-1、eNOS和APP mRNA表达水平的比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脑血管内皮细胞功能障碍与AD的关系 |
| 4.2 APP的表达水平与AD和血管损伤的关系 |
| 5 本实验结论 |
| 全文结语 |
| 创新之处 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附录1:β-细辛醚气相质谱联用图1 |
| 附录2:β-细辛醚气相质谱联用图2 |
| 附录3:β-细辛醚气相质谱联用图3 |
| 附录4:β-细辛醚气相质谱联用图4 |
| 附录5:β-ACTIN PCR产物上游测序图 |
| 附录6:β-ACTIN PCR产物下游测序图 |
| 附录7:ET-1 PCR产物上游测序图 |
| 附录8:ET-1 PCR产物下游测序图 |
| 附录9:ENOS PCR产物上游测序图 |
| 附录10:ENOS PCR产物下游测序图 |
| 附录11:APP PCR产物上游测序图 |
| 附录12:APP PCR产物下游测序图 |
| 在学期间发表论文和参与课题清单 |
| 致谢 |
四、补肾活血化痰方对AD大鼠学习记忆功能及脑神经元型一氧化氮合酶的影响（论文参考文献）
- [1]基于线粒体相关蛋白通路探讨参麻益智方对血管性认知障碍大鼠的作用机制[D]. 孙成成. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]从调控小胶质细胞极化研究益肾化浊方改善阿尔茨海默病神经炎症反应的作用机制[D]. 张伟. 天津中医药大学, 2021(01)
- [3]健脾益智法调节AD大鼠脑内尿素代谢的作用机制研究[D]. 陈思馨. 山东中医药大学, 2020(01)
- [4]基于PI3K/Akt信号通路探讨益髓解毒法对血管性痴呆大鼠作用机制的研究[D]. 高玲. 长春中医药大学, 2019(01)
- [5]参附注射液治疗血管性痴呆的作用及分子机制的实验研究[D]. 邵亚兰. 南昌大学, 2019
- [6]艾灸对Alzheimer病模型大鼠JNK信号通路及细胞凋亡相关因子影响的研究[D]. 万博鹏. 湖北中医药大学, 2014(12)
- [7]巴戟天低聚糖益脑作用机制研究[D]. 邓少东. 广州中医药大学, 2013(05)
- [8]p38MAPK信号通路在逆灸防治阿尔茨海默病模型大鼠中的作用研究[D]. 李熙. 湖北中医药大学, 2012(01)
- [9]寿尔智胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠神经元突触损伤的保护作用及机制研究[D]. 聂志玲. 湖北中医药大学, 2011(05)
- [10]β-细辛醚对AD大鼠学习记忆的影响及血管保护机制研究[D]. 李志强. 暨南大学, 2010(09)