一、INTERACTIONS BETWEEN THE HUMAN GASTRIC CARCINOMA CELL AND THE HUMAN VASCULAR ENDOTHELIAL CELL（论文文献综述）
徐芬[1]（2021）在《含铜胺氧化酶1（AOC1）在胃癌进展中的作用及分子机制研究》文中提出目的:胃癌（gastric cancer）是世界上第五大常见的恶性肿瘤,每年大约有100万例新增确诊病例;也是第三大癌症相关死亡原因,每年的死亡病例超过72万例。目前,胃癌仍然是严重的全球健康负担和死亡威胁。含铜胺氧化酶1（Amine oxidase copper-containing 1,AOC1）是一种含铜的酶,负责催化短链脂肪二胺的氧化脱氨化,主要底物为腐胺和组胺。目前,未有研究报道AOC1在癌症进展中扮演的角色。本研究旨在探究AOC1在胃癌组织和细胞中的表达模式、具体生物学功能以及调控的分子机制。方法:1、利用GEPIA在线数据库分析、q RT-PCR和western blot等方法,分析并检测AOC1在人胃癌样本组织中的m RNA和蛋白表达模式。2、胃癌细胞系AGS和MKN45被挑选作为体外研究细胞模型。特异性si RNA被设计、合成并转染进细胞以敲低AOC1在细胞中的表达。pc DNA3.1重组质粒被设计并转染进细胞以过表达AOC1在细胞中的表达。3、CCK-8、克隆形成、流式细胞术、Transwell、western blot等方法被用于检测AOC1表达变化对AGS和MKN45细胞增殖、生长、凋亡、迁移和侵袭等细胞生物学功能的影响。4、AKT通路激动剂IGF-1和抑制剂Ipatasertib（GDC-0068）被用于进行拯救实验。5、使用Illumina Hiseq平台对转染空pc DNA3.1质粒或转染pc DNA3.1-AOC1过表达质粒的AGS细胞进行高通量转录组测序,以寻找AOC1在胃癌细胞中过表达后引起的转录组改变。结果:1、与GEPIA收纳的211例正常胃上皮组织相比,AOC1 m RNA水平在GEPIA收纳的408例人胃腺癌（stomach adenocarcinoma,STAD）组织中被显着上调。同样,与邻近的癌旁组织相比,在临床收集的30例人胃癌组织中,AOC1 m RNA和蛋白表达水平均被显着上调。2、AOC1表达下调显着抑制了AGS和MKN45细胞的增殖、生长、迁移、侵袭和上皮-间充质转化（epithelial–mesenchymal transition,EMT）,并诱导了细胞凋亡;AOC1过表达显着促进了AGS细胞的增殖、生长、迁移、侵袭和EMT过程,并抑制了细胞凋亡。3、敲低AOC1降低了AGS和MKN45细胞中AKT的磷酸化水平及其下游效应器p70S6K和Cyclin D1的表达;与之相反,AOC1过表达增强了AKT的磷酸化水平及其下游效应器p70S6K和Cyclin D1的表达。而IGF-1的处理拯救了AOC1敲低对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。与此同时,Ipatasertib的处理阻碍了AOC1过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。4、高通量转录组测序结果表明每个样品平均产出6.29 Gb数据,平均每个样品检测到14705个基因。在AOC1过表达AGS细胞中,鉴定到182个差异表达的基因,其中,表达显着上调的基因152个,表达显着下调的基因30个。结论:综上所述,本研究发现AOC1在胃癌组织中的表达被显着上调,并通过激活AKT信号通路发挥关键的促癌因子功能,显着促进了胃癌细胞的进展。靶向AOC1的特异性抗体或小分子抑制剂将有利于未来胃癌的治疗。
李成盼[2]（2021）在《早期肿瘤行为片上建模研究》文中指出癌症是全球的主要死亡原因,严重威胁人类健康。癌症是一种阶段性演进的复杂疾病,涉及肿瘤早期生长和晚期转移。处于肿瘤早期的患者,通过手术、化疗、放疗等手段的干预可以取得较好的预后。然而,大部分肿瘤患者在早期通常没有明显的临床不适症状,初次就诊时己处于肿瘤晚期。由于缺乏有效的转移肿瘤治疗方案,导致患者生存率极低。因此,全面了解原发肿瘤早期发展以及转移肿瘤的早期形成,对于肿瘤的治疗具有重要意义。当前,研究体内肿瘤行为的常规方法是肿瘤成像,然而成像仪器仅能检测大小为毫米量级以上的肿瘤,从肿瘤发生至肿瘤生长为毫米尺度这一过程中（本文定义为肿瘤早期）,由于无法成像,肿瘤的发展及肿瘤细胞的行为仍不清楚。类似地,肿瘤在经血管远端转移并定植的过程中,肿瘤细胞经内渗、外渗及定植形成转移肿瘤的动态过程也因难以跟踪而少有报道。传统的二维细胞培养模型无法复现体内的肿瘤微环境,动物模型又与人存在种属差异且无法可视化。因此,构建新型体外肿瘤模型十分必要。近年来,随着微流控技术的发展,在芯片上模拟肿瘤行为成为可能。然而,当前的片上肿瘤尺寸依然较大（直径大于300 μm）,不仅不能揭示肿瘤极早期行为,也很少涉及转移肿瘤的形成过程。据此,本文设计制作了微流控芯片,分别用于原发肿瘤早期（直径小至30μm）发展以及转移肿瘤（继发肿瘤）早期形成的建模研究,主要研究内容如下:首先,设计制作了一款微流控芯片,将原代内皮细胞及细胞外基质混合注入芯片中进行动态培养以构建血管芯片。主要结果显示,内皮细胞通过自组装形成了片上微血管网络,内皮细胞密度及流动影响着微血管网络的结构,血管内皮生长因子能够诱导血管出芽。其次,基于研制的血管芯片,整合芯片外制备的肿瘤球,研究了原发肿瘤的早期发展。主要结果表明,血管生成和成纤维细胞能够促进原发肿瘤生长和肿瘤细胞迁移,肿瘤尺寸越小,肿瘤细胞迁移能力越强。肿瘤的演进会导致肿瘤周围血管异常,如血管密度低、管径不一、杂乱无章等。此外,本研究首次片上复现了肿瘤细胞上皮间质转化的动态过程以及血管拟态的形成。最后,设计制作了另一款微流控芯片,将肝细胞、肝星状细胞、原代内皮细胞及细胞外基质混合注入芯片中进行三维动态共培养,以构建血管化肝脏微环境。基于该芯片,研究了转移肿瘤的早期发展过程,可视化展示了乳腺癌细胞内渗进入血管、外渗出血管并定植生长的动态过程。主要结果显示,转移肿瘤的形成会影响转移部位的细胞功能。本文不但体外模拟了早期肿瘤行为,也展示了肿瘤细胞的转移定植过程,为原发肿瘤早期发展及转移肿瘤早期形成的研究提供了新思路。本研究对肿瘤芯片构建、肿瘤药物筛选以及肿瘤诊断治疗具有重要的参考价值。
尹倩茹[3]（2021）在《内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究》文中认为去整合素和金属蛋白酶28（ADAM28）是解联蛋白和金属蛋白酶结构域（ADAM）家族成员之一。ADAM28具有细胞黏附和蛋白水解酶的多种功能,与体内多种恶性肿瘤的生长和转移有关,但其在胃癌中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨胃癌来源和内皮来源ADAM28对胃癌细胞的影响及其相关机制。在这项研究中,我们发现ADAM28在胃癌细胞系中表达上调。ADAM28高表达患者的生存期明显短于ADAM28低表达患者。过表达/敲低胃癌细胞ADAM28的表达可体外调节细胞增殖、凋亡和迁移能力。除此之外,在内皮细胞和胃癌细胞共培养体系中,通过过表达/敲低Transwell上室中人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的ADAM28,可以调节下室胃癌细胞的凋亡。此外,我们发现胃癌来源和内皮来源的ADAM28都是通过切割血管性血友病因子（vWF）,消除了 vWF通过整合素β3以及TP53磷酸化和CASP3激活引起的胃癌细胞凋亡。总之,我们的研究结果提供了实验证据,证明内皮来源和胃癌来源的ADAM28可能通过切割vWF,从而消除vWF诱导的胃癌细胞凋亡,从而起到促转移的作用。
崔新野[4]（2021）在《长五肽PTX3在胃癌乳斑转移中相关作用研究》文中指出胃癌是一种危及生命的消化道恶性肿瘤,是癌症相关死亡率的第三大原因,肿瘤的再生和转移给胃癌的防治带来了巨大的挑战。肿瘤微环境是由于肿瘤细胞与宿主之间的相互作用而形成的,可以调节癌细胞与其他细胞因子之间的串扰作用。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在肿瘤相关炎症中起着重要的主导作用,作为肿瘤发生的重要调节因子,这些细胞具有双重的肿瘤和抗肿瘤活性。TAMs通过释放多种细胞因子,包括趋化因子、炎症因子和生长因子,促进实体肿瘤的进展和转移,同时有文献报道TAMs能够对肿瘤的干性产生影响。TAMs主要表现在两种亚型,即M1（经典激活的巨噬细胞）,它们被脂多糖（LPs）和干扰素γ（IFN-γ）和M2（交替激活的巨噬细胞）极化,在IL-4、IL-10或IL-13存在下极化,这两种细胞类型对肿瘤的进展通常有相反的影响。在恶性肿瘤中,巨噬细胞主要表达M2样表型,可以改善肿瘤细胞的生长和存活,刺激血管生成和肿瘤转移。腹膜转移仍然是胃癌最常见的转移模式之一,对胃癌患者的生存率有显着影响。由于乳斑是肿瘤细胞在腹膜传播中的主要植入部位,对腹膜转移机制的研究主要集中在乳斑上。乳斑是人类和动物腹腔内的原始淋巴组织,主要分布在大网膜、肠系膜和盆底,是一种微小的解剖结构,主要由大量的巨噬细胞和淋巴细胞组成,参与清除腹腔颗粒、细菌和肿瘤细胞。乳斑是卵巢癌、结肠癌和胃癌的常见转移部位,更重要的是,乳斑是腹膜的第一道防线,在胃癌腹膜转移过程中优先选择性地侵袭乳斑,从而形成微转移。长五肽Long-pentraxin3（PTX3）是长五肽亚家族的原型成员,由天然免疫细胞产生,在炎症调节、天然免疫以及肿瘤相关炎症（包括肿瘤发生、血管生成、转移和肿瘤免疫调节）中发挥重要影响。许多文献研究报道了 PTX3可以在多种类型恶性肿瘤（乳腺癌、肺癌、皮肤癌、黑色素瘤等）中发挥生物学作用,能够促进或抑制肿瘤细胞的侵袭及转移等特性,但目前就PTX3与胃癌进展和乳斑转移以及干性的相关生物学作用尚未报道,因此阐明PTX3在胃癌细胞中相关生物学特性及机制至关重要。本课题选择人胃癌细胞系及615小鼠胃癌细胞,通过在体外、体内一系列实验,研究PTX3对胃癌细胞干性以及迁移侵袭等生物学行为影响,并进一步探讨了乳斑转移环境下胃癌细胞PTX3对乳斑巨噬细胞极化的作用情况。第一部分 PTX3在胃癌组织及细胞系中的表达以及与肿瘤相关巨噬细胞表达相关性目的:探讨PTX3在胃癌组织及细胞系中表达差异以及与巨噬细胞表达相关性。方法:首先通过TCGA数据库分析PTX3在胃癌及正常组织表达水平,其次通过免疫组化（IHC）、蛋白印迹（Western-blot）和实时定量PCR（qRT-PCR）实验,检测PTX3在胃癌组织与正常组织中的表达差异;同时,通过蛋白印迹以及实时定量PCR进一步验证PTX3在胃癌细胞系中的表达差异。另外,我们在不同表达水平PTX3的胃癌组织中,进行免疫组化染色,检测CD86和CD206的蛋白表达。研究不同水平PTX3表达下,M1型和M2型巨噬细胞表达情况。结果:通过TCGA数据库分析PTX3在胃癌及正常组织表达差异,结果显示,PTX3 mRNA水平在胃癌组织（n=375）中较正常组织（n=32）表达降低（*p<0.05）。经免疫组化评分以及组织蛋白印迹和组织PCR结果提示PTX3在胃癌组织的表达量较正常组织明显降低（**p<0.01,***p<0.001）。另外,通过对胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901与胃粘膜上皮细胞GES-1中表达差异分析发现PTX3在胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901的蛋白表达量低于胃粘膜上皮细胞GES-1（***p<0.001）。最后,通过对不同水平PTX3的胃癌组织进行免疫组化实验检测巨噬细胞表达差异,发现在PTX3高表达的胃癌组织中M1型巨噬细胞标志蛋白CD86浸润增加,M2型巨噬细胞标志蛋白CD206表达较低,在低表达PTX3的胃癌组织中CD86表达较低,CD206 表达较高（*p<0.05,**p<0.01）。结论:1.长五肽PTX3的mRNA表达量和蛋白表达量在胃癌组织及胃癌细胞系中显着降低。2.胃癌组织中,PTX3的表达与M1型巨噬细胞CD86表达呈正相关,与M2巨噬细胞CD206表达呈负相关。第二部分 探讨PTX3对胃癌细胞上皮间充质转化过程及胃癌干性影响目的:探讨PTX3对胃癌细胞迁移侵袭以及胃癌干性和上皮间质转化相关影响。方法:在胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中经过瞬时转染,过表达PTX3,然后通过Transwell实验、胃癌细胞成球实验等实验方法,研究上调PTX3后对胃癌细胞迁移、侵袭特性以及干性的相关影响作用,进一步通过蛋白印迹实验,检测PTX3上调后胃癌细胞中侵袭相关蛋白、上皮间充质转化及干性相关蛋白指标变化趋势。另外,将PTX3过表达慢病毒载体转染胃癌细胞BGC-823,筛选出稳定细胞株后,将阴性对照组（Scramble）和过表达PTX3组（PTX3）（3×106）进行裸鼠皮下接种实验,并观察肿瘤生长情况,绘制生长曲线,25天后提取肿瘤组织,并测量肿瘤重量,行免疫组化检测,观察对比相关指标变化。结果:通过Transwell实验表明,实验组（PTX3）的胃癌细胞迁移和侵袭能力较对照组（CTL）明显下降（**p<0.01）。同时,经成球试验证明,上调PTX3后胃癌细胞成球数量及大小显着低于对照组（**p<0.01）。另外,经PTX3过表达质粒转染胃癌细胞处理48小时后行Western-blot检测,实验组胃癌细胞中,侵袭相关指标,MMP2和MMP9表达水平显着下降;上皮间充质转化（EMT）相关指标,降低Snail,N-cadherin和Vemintin的蛋白表达水平,并且增加E-cadherin的蛋白表达水平;最后,胃癌干性相关指标SOX2,ALDH1,CD44,CD133,LGR5均有明显下降。小鼠皮下植瘤实验中,PTX3上调组肿瘤生长速度、重量较对照组均下降,同时IHC检测后,实验组E-cadherin表达水平升高,N-cadherin表达水平降低。结论:1.上调PTX3可以抑制胃癌细胞体外上皮间质转化的能力,并且降低胃癌细胞迁移及侵袭的能力。2.过表达PTX3后降低了胃癌细胞肿瘤球的形成能力、肿瘤干性相关蛋白（SOX2,ALDH1,CD44,CD133,LGR5）表达水平,提示PTX3可以抑制胃癌细胞干性。3.体内实验证明,过表达PTX3可以降低胃癌的皮下成瘤能力,抑制肿瘤体内上皮间充质转化能力。第三部分 体外实验探讨胃癌细胞PTX3对乳斑转移环境中巨噬细胞极化影响及相关机制研究目的:通过体外模拟胃癌乳斑转移微环境,探讨胃癌细胞中PTX3对肿瘤相关巨噬细胞极化影响及机制研究。方法:首先,通过CCK8实验检测外源性重组PTX3（rhPTX3）对人单核细胞THP-1的活性影响,选择适宜浓度rhPTX3加入到THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞的过程中,48小时后进行流式细胞术检测CD206表达,同时在转录水平上对M2细胞基因标志物Arg1,IL10,TGF-β和CCL22进行qRT-PCR实验。其次,PTX3过表达质粒（PTX3）及阴性对照质粒（CTL）瞬时转染胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901细胞后,将实验组与对照组分别与PMA处理过的THP-1细胞（M0）进行共培养,体外模拟胃癌乳斑转移,48小时后,通过流式细胞术实验方法和细胞免疫荧光方法在蛋白水平检CD86,CD206表达变化,同时通过qRT-PCR实验观察M1型巨噬细胞基因表达标志物IL1β,TNF-α,CXCL9,CCR7和M2基因标志物Arg1,IL10,TGF-β以及CCL22表达变化。最后,胃癌细胞上调PTX3后行qRT-PCR实验检测IL4 及 IL10 基因表达变化,并通过 western-blot 检测 IL4,IL10,JNK1/2 以及 p-JNK 1/2表达差异,检测相关通路蛋白变化。结果:1.CCK8活性实验发现不同浓度（0,10,20,40,60ng/ml）重组PTX3对THP-1细胞活性无明显抑制作用,在40ng/ml浓度对THP-1存活率最高。2.通过流式细胞术和实时定量PCR实验方法,发现外源性PTX3能够降低CD206和Arg1,IL10,TGF-β 和 CCL22 的表达（*p<0.05,**p<0.01）。3.胃癌细胞中过表达 PTX3与M0巨噬细胞共培养体外模拟乳斑转移环境,对巨噬细胞进行流式细胞术和免疫荧光实验,发现在蛋白水平上,CD206表达降低,CD86表达升高,通过qRT-PCR检测发现,过表达PTX3组的巨噬细胞在转录水平上Arg1,IL10,TGF-β及CCL22表达下降,同时提高 IL1β,TNF-α,CXCL9 和 CCR7 的表达（*p<0.05,**p<0.01）。4.胃癌细胞中上调PTX3后,PCR结果显示IL4和IL10的在基因水平降低,蛋白印迹结果显示IL4,IL10以及p-JNK1/2表达下降。结论:1.外源性PTX3通过抑制M2型巨噬细胞蛋白水平和转录水平的表达,从而抑制M2巨噬细胞的极化。2.胃癌细胞与M0巨噬细胞共培养体外模拟乳斑转移条件下,胃癌细胞中过表达PTX3后能抑制巨噬细胞向M2型巨噬细胞的极化,促进向M1型巨噬细胞的极化。3上调PTX3通过抑制JNK1/2磷酸化,进而负调控胃癌细胞中IL4和IL10表达,从而抑制M2巨噬细胞的极化。第四部分 体内实验研究过表达PTX3在小鼠乳斑胃癌转移中相关作用目的:探讨胃癌细胞PTX3对小鼠乳斑胃癌转移干性及巨噬细胞极化相关影响。方法:选择615小鼠来源的胃癌细胞MFC,将过表达PTX3（LV-PTX3）以及阴性对照（Scramble）的慢病毒载体转染后,经过稳定筛选,注射入615小鼠腹腔内,制作胃癌腹膜转移模型。在注射后的第14天（实验组和对照组各5只）,脱颈处死,在避光处提取小鼠大网膜置入福尔马林中固定,行组织免疫荧光实验,通过镜下观察实验组和对照组胃癌细胞MFCs在大网膜乳斑区的转移程度。同时,通过免疫组织化学染色,观察两组小鼠大网膜乳斑区胃癌干性指标LGR5表达变化,以及肿瘤相关巨噬细胞标志物CD86和CD206表达变化。结果:1.MFCs腹腔注射后第14天,过表达PTX3实验组胃癌细胞在小鼠腹腔乳斑区的肿瘤定植数量低于对照组细胞。2.实验组小鼠乳斑区M2型巨噬细胞标志物CD206表达降低,M1型巨噬细胞标志物CD86表达增高。3.MFCs上调PTX3后,实验组小鼠乳斑区LGR5蛋白表达水平较对照组明显下降。结论:1.过表达PTX3能够抑制小鼠腹腔内胃癌细胞向乳斑区的定植转移以及成团能力。2.上调PTX3能够抑制乳斑区M2细胞的极化,促进向M1细胞极化。3.过表达PTX3可以降低小鼠乳斑转移区胃癌细胞干性。
阳帆[5]（2020）在《紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究》文中提出目的:紫花牡荆素能抑制多种肿瘤细胞的增殖,本研究旨在研究其对胃癌细胞迁移与侵袭的影响,并探讨其分子机制,从而为紫花牡荆素的抗肿瘤机制提供依据。方法:1)Casticin对胃癌细胞的影响体外培养AGS和NCI-N87细胞,加入不同浓度Casticin后进行CCK-8、克隆形成实验;Transwell小室及划痕实验检测细胞的侵袭能力及迁移能力;流式细胞仪、DAPI染色法检测细胞周期及细胞凋亡。qRT-PCR、WB检测MMP-2、9的表达,明胶酶谱检测其活性。2)Casticin抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制研究紫花牡荆素处理AGS和NCI-N87细胞后,qRT-PCR和WB检测其对RECK表达的影响,BSP实验检测Casticin对RECK甲基化状态的影响;siRECK、RECK-OV转染胃癌细胞后,qRT-PCR、WB检测MMP-2和MMP-9表达变化,以明确胃癌细胞中RECK与MMP-2、-9间的关系;PP2A抑制剂（LB-100）和PP2A激活剂（DES）处理胃癌细胞后,qRT-PCR、WB检测细胞中RECK、MMP-2和MMP-9的表达,BSP检测RECK甲基化状态变化。LB-100和DES处理胃癌细胞后,WB检测DNMT1,MEK和p-MEK表达,以明确PP2A活化/抑制引起RECK表达变化的信号通路。qRT-PCR、WB检测Casticin对PP2A、DNMT1、MEK和p-MEK表达的影响;此外采用PP2A抑制剂处理后用Casticin处理,并通过回复验证明确Casticin对PP2A表达及下游信号分子的影响。3)移植瘤裸鼠模型评价Casticin的抑癌效果分别AGS、NCI-N87细胞移植于裸鼠体内,给予不同浓度Casticin处理,并设置对照组,期间持续观察肿瘤体积变化;采用免疫组化染色、WB检测MMP-2/9、PP2A,RECK 的表达变化。结果:1)Casticin对胃癌细胞的影响通过CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术、DAPI染色、划痕实验、Transwell、qRT-PCR、WB和明胶谱实验的结果,发现不同浓度Casticin可以显着抑制胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭和MMP-2/9的表达及活性,且呈浓度依赖性;而对人胃平滑肌细胞影响较小。2)Casticin抑制胃癌细胞迁移、侵袭的分子机制qRT-PCR、WB和甲基化实验发现Casticin通过促进PP2A表达,进而抑制MEK活化和DNMT1的表达,削弱RECK甲基化并上调RECK表达,从而抑制MMP-2/9表达,最终使得细胞迁移和侵袭能力下降。3)利用胃癌裸鼠成瘤模型评价Casticin的抑癌效果Casticin处理后移植瘤体积明显小于对照组;免疫组化结果发现,Casticin处理后的肿瘤组织中MMP-2/9明显低表达,呈浓度依赖性;相反,PP2A和RECK的表达增高。WB检测发现Casticin处理后肿瘤组织中MMP-2/9蛋白表达量均有明显下调,PP2A,RECK蛋白表达量均有明显上调。结论:1)Casticin有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭与迁移;2)Casticin通过促进PP2A表达来抑制MEK活化和DNMT1表达,进而上调RECK表达,导致MMP-2/9的表达下降,最终抑制胃癌细胞侵袭和转移;3)Casticin可明显抑制移植瘤小鼠皮下瘤的生长,且Casticin处理后肿瘤组织中MMP-2/9明显低表达,同时促进了肿瘤组织中PP2A和RECK的表达。
李亚[6]（2020）在《新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究》文中进行了进一步梳理我国是胃癌大国,中西医结合治疗是我国胃癌综合治疗的独特模式。临床实践证实采用新加良附方（高良姜、香附、穿山龙）联合化疗针对进展期胃癌较单纯化疗具有更高的临床缓解率和更优的生活质量。机制研究发现新加良附方抗胃癌作用与调控凋亡相关基因表达有关,但其上游调控机制尚未明确。基于前期基础,本研究拟从microRNA角度,深入探讨新加良附方及穿山龙主要成分薯蓣皂苷元对miR-34a/SIRT1/p53通路及miR-34a凋亡相关靶基因的调控作用和对凋亡信号通路的激活作用,明确新加良附方及薯蓣皂苷元的作用机制,为新加良附方治疗胃癌提供基础研究依据。目的通过体内外实验明确新加良附方及成分薯蓣皂苷元对人胃癌细胞功能的抑制作用,基于miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路,明确新加良附方及薯蓣皂苷元抗胃癌作用机制。方法1.新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究①新加良附方及薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验:CCK-8实验检测新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞增殖的作用,流式细胞术检测新加良附方及薯蓣皂苷元对胃癌细胞周期及凋亡的调控作用,划痕实验检测新加良附方抑制胃癌细胞迁移作用;②新加良附方、薯蓣皂苷元调控miR-34a作用:qPCR检测正常胃黏膜上皮细胞及胃癌细胞miR-34a表达,慢病毒感染构建过表达mi R-34a的胃癌HGC-27细胞,CCK-8方法检测过表达miR-34a胃癌HGC-27细胞增殖功能,划痕实验检测过表达mi R-34a胃癌细胞迁移能力,并通过qPCR方法检测新加良附方、薯蓣皂苷元对miR-34a基因水平影响;③新加良附方、薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究:qPCR方法检测过表达miR-34a后HGC-27细胞miR-34a/SIRTl/p53通路及miR-34a靶基因表达水平,qPCR方法检测新加良附方、薯蓣皂苷元对miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a靶基因及Caspase凋亡通路的作用,Western blot检测新加良附方、薯蓣皂苷元对Caspase凋亡通路作用。2.新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究BSP方法检测胃癌细胞miR-34a甲基化水平,并构建HGC-27胃癌细胞荷瘤小鼠模型,设正常对照组、模型组、新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组、5-Aza-CdR组、中剂量联合组及高剂量联合组,药物干预18天,观察裸鼠一般状态;测量移植瘤长短径,计算瘤体积和抑瘤率,观察裸鼠生存期;qPCR方法检测miR-34a表达情况;Western blot方法检测miR-34a/SIRT1/p53相关蛋白表达及Caspase凋亡通路情况。结果1.新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究新加良附方抑制人胃癌细胞功能实验:新加良附方呈浓度及时间依赖性地抑制HGC-27、MGC80-3及AGS细胞增殖;新加良附方提高G1期HGC-27细胞,降低G2期细胞;新加良附方可诱导HGC-27及MGC80-3细胞凋亡,其中诱导HGC-27细胞凋亡作用显着;与对照组比较,新加良附方组除24h 4mg/mL浓度外,其余各组均可抑制胃癌HGC-27细胞迁移功能,作用呈时间及浓度依赖性;新加良附方可显着抑制MGC80-3细胞迁移功能,作用呈时间依赖性,差异有统计学意义;各浓度新加良附方24h及48h均可抑制AGS细胞迁移;薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验:薯蓣皂苷元呈时间及浓度依赖性地抑制胃癌HGC-27、MGC80-3及AGS细胞增殖作用,差异有统计学意义;薯蓣皂苷元干预后胃癌细胞周期无明显改变;薯蓣皂苷元可诱导HGC-27及MGC80-3细胞凋亡,其中诱导HGC-27细胞凋亡作用显着;新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a作用:HGC-27、MGC80-3及AGS细胞中miR-34a相对表达量显着低于正常细胞GES-1,p<0.05;与阴性对照组相比较,过表达miR-34a后,HGC-27细胞增殖能力受到显着抑制,并可显着抑制其迁移能力;新加良附方及薯蓣皂苷元干预后,HGC-27及AGS细胞miR-34a表达水平升高,p<0.01;新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究:过表达miR-34a显着上调p53并下调SIRT1表达水平,可提高Bax及Caspase-3 mRNA表达水平,降低Bcl-2及Survivin的mRNA表达水平;新加良附方及薯蓣皂苷元干预可提高p53表达,降低SIRT1表达水平,并可上调Bax及Caspase-3的mRNA表达水平,降低Bcl-2及Survivin的mRNA表达水平,p<0.01,差异有统计学意义;Z-VAD-FMK可降低新加良附方及薯蓣皂苷元诱导的HGC-27细胞凋亡;新加良附方作用后可降低Caspase-9、Caspase-3前体水平,升高活化Caspase-3的表达水平;2.新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究胃癌细胞HGC-27在miR-34a各位点甲基化水平均较高,选取HGC-27细胞构建胃癌荷瘤小鼠模型,药物干预后观察到新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组及中剂量联合组、高剂量联合组裸鼠状态较好,反应灵敏,活动及饮食、饮水量正常,5-Aza-CdR组裸鼠一般状态较差。5-Aza-CdR组裸鼠体重于实验给药第8天后逐渐下降,第11天其体重低于新加良附方高剂量组,差异有统计学意义,第15天,其体重低于模型组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组及高剂量联合组,p<0.05,第18天,其体重低于其余各组,p<0.05,差异有统计学意义。5-Aza-CdR组抑瘤率为32.08%,与模型组比较,p>0.05,差异无统计学意义,中剂量联合组抑瘤率为35.00%,高剂量联合组抑瘤率为37.18%,与模型组相比较,p<0.05,差异有统计学意义。模型组平均生存时间为46.33±10.50天,新加良附方中剂量组、新加良附方高剂量组、薯蓣皂苷元组、中剂量联合组及高剂量联合组裸鼠均未出现死亡现象,平均生存时间为57.00±0.00天,具有延长荷瘤裸鼠生存时间的趋势,5-Aza-CdR组裸鼠平均生存时间为40.33±7.37天,生存时间较模型组短。除新加良附方中剂量组外,其余各治疗组均可提高胃癌miR-34a表达,以联合组作用最为显着;新加良附方中剂量、高剂量、薯蓣皂苷元及高剂量联合组均可显着增加p53蛋白的表达,且药物干预各组均可显着抑制SIRT1 蛋白的表达,可降低 Bcl-2、Survivin 表达,并提高 Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 及 Caspase-3 底物 Cleaved PARP 蛋白的表达。结论1.miR-34a表达水平异常与胃癌发生密切相关;2.新加良附方可抑制胃癌细胞增殖及迁移、调节细胞周期、诱导凋亡,其成分薯蓣皂苷元可抑制胃癌细胞增殖,并诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与调控miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a凋亡相关靶基因及激活Caspase凋亡通路相关;3.新加良附方联合5-Aza-CdR可抑制胃癌裸鼠移植瘤生长,并可改善裸鼠一般状态,有维持体重、延长其生存时间的趋势,机制可能与调控miR-34a/SIRT1/p53通路、miR-34a凋亡相关靶蛋白及Caspase凋亡信号通路相关。
王若汗[7]（2020）在《胡桃楸中胡桃醌的提取及抗肿瘤活性研究》文中研究表明胡桃楸在我国资源丰富,而胡桃楸中的胡桃醌已被一些研究证明其不仅有显着的止血与抗菌功能,而且一些体内外实验也表明其在抗肿瘤领域也可以发挥作用。然而这种抗肿瘤作用的分子机制仍不清楚。研究胡桃醌干预下胃癌细胞的遗传学改变对于其用于胃癌治疗的临床实践以及揭示胡桃醌发挥抗肿瘤作用的分子生物学机制有着重要的意义。本文通过乙醇超声提取法得到胡桃醌,通过核磁共振法鉴定其结构。通过CCK-8法来筛选最适敏感菌株来进行胡桃醌抗肿瘤机制的研究,在人宫颈癌细胞（HELA）、人胃癌细胞（SGC-7901）,人肝癌细胞株（HeP-2）,人肺腺癌细胞株（A549）,乳腺癌细胞株（MCF7）,人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y-P9）中进行筛选,实验结果显示胡桃醌对6种肿瘤细胞都有一定的抑制作用,其中对人胃癌细胞（SGC-7901）是六种肿瘤细胞中最敏感细胞,因此,此本次实验以人胃癌细胞（SGC-7901）作为研究对象,进行差异基因的筛选。通过对高通量测序数据进行生物信息学分析,我们最终筛选得到胡桃醌处理的人胃癌细胞（SGC-7901）和对照组细胞的4248个差异表达的基因,其中2364个差异基因显着上调,1884个差异基因显着下调。差异基因分析中Fold Change变化最大的10个上调差异基因为:AL133352.1、TRIM39-RPP21、MMP23A、MTND4P12、AC016717.1、SPATC1、AC008735.1、AC010442.2、PCDH17、CR559946.2;Fold Change变化最大的10个下调差异基因为:SPI1、AC148477.5、RPS10-NUDT3、GAGE12J、PINCR、TNFSF12-TNFSF13、INO80B-WBP1、ISY1-RAB43、CSF3R、AC005154.6。进一步KEGG信号通路富集分析得这些差异基因主要富集在酒精中毒信号通路、Hippo信号通路、Apelin信号通路以及p53信号通路等。最后通过Westem-blot及RT-PCR检测来进行验证试验,我们发现人胃癌细胞（SGC-7901）凋亡相关基因p53蛋白表达水平在胡桃醌作用后显着上调;不同浓度胡桃醌诱导人胃癌细胞（SGC-7901）凋亡后p53基因mRNA表达水平明显增强,且与胡桃醌浓度呈剂量依赖关系。本研究结果证实了胡桃醌导致人胃癌细胞（SGC-7901）凋亡的机制可能是诱导细胞凋亡水平而发挥的,与调节凋亡相关基因p53表达相关,该研究为临床上利用胡桃醌靶向抑制肿瘤细胞生长的方法提供了一定的科学依据。
刘建鑫[8]（2020）在《基于TGF-β/Smad通路探讨八宝丹抑制胃癌细胞上皮-间质转化的作用机制》文中研究表明目的:通过体内外实验探讨八宝丹（Babao Dan;BBD）对胃癌细胞上皮-间质转化（EMT）的影响及其作用机制,为八宝丹的临床应用提供实验依据。方法:体外实验:（1）不同浓度BBD（0、0.25、0.5、0.75 mg/mL）胃癌细胞AGS和MGC80-3,划痕实验和Transwell实验分析细胞迁移能力;Transwell实验分析细胞侵袭能力;粘附实验分析细胞粘附能力。（2）不同浓度BBD（0、0.25、0.5、0.75 mg/mL）干预胃癌细胞AGS和MGC80-3,Q-PCR实验和Western Blot实验检测BBD对EMT相关基因（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9）mRNA和蛋白表达的影响。（3）不同浓度BBD干预后,Western Blot实验检测TGF-β/Smad通路相关蛋白（TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3）表达的影响。（4）加入外源性TGF-β1因子（10 ng/mL）刺激和BBD（0.5 mg/mL）干预细胞后,采用Western Blot实验和Q-PCR实验检测TGF-β1因子和BBD对TGF-β/Smad通路相关蛋白（Smad2/3、p-Smad2/3）和EMT相关基因mRNA和蛋白（E-cadherin、N-cadherin）表达的影响;Transwell实验分析细胞迁移和侵袭能力。体内实验:构建MGC80-3皮下移植瘤裸鼠模型,按瘤体体积随机分为Control组和BBD组（n=10）,BBD组给予0.25g/kg灌胃,对照组给予等体积生理盐水灌胃,每周六天,隔天测量裸鼠瘤体体积和体重,四周后处死,取出移植瘤。（1）通过测量移植瘤体积研究BBD对胃癌移植瘤生长的影响,计算裸鼠的平均体重研究BBD对裸鼠体重的影响。（2）采用Q-PCR和Western Blot实验检测瘤体组织中EMT以及TGF-β/Smad通路相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3）表达的影响。（3）通过HE实验评测BBD对裸鼠肝、肾毒性。结果:体外实验:（1）划痕实验和Transwell实验表明BBD能抑制细胞迁移能力（P<0.05或P<0.01）;Transwell实验显示BBD能抑制细胞侵袭能力（P<0.05或P<0.01）;粘附实验显示BBD能抑制细胞粘附能力（P<0.01）。（2）Q-PCR结果显示BBD能上调E-cadherin而下调N-cadherin的mRNA表达水平且能下调N/E-cadherin的比值（P<0.05或P<0.01）;Western Blot实验结果显示BBD能上调E-cadherin的表达（P<0.05或P<0.01）,不同程度地下调N-cadherin、Vimentin、ZEB1、ZEB2、Twist1、MMP2、MMP9的水平（P<0.05或P<0.01）。BBD对MGC80-3的Vimentin表达没有影响（P>0.05）。（3）WesternBlot实验结果显示BBD能下调TGF-β1、p-Smad2/3的表达（P<0.05或P<0.01）,对Smad2/3的表达无影响（P>0.05）。（4）加入外源性TGF-β1因子刺激后,Western Blot实验结果显示相对于对照组,TGF-β1因子可上调N-cadherin、p-Smad2/3的表达（P<0.05或P<0.01）,Smad2/3的表达无影响（P>0.05）。Q-PCR结果显示相对于对照组,TGF-β1因子可上调N/E-cadherin mRMA的比值（P<0.05或P<0.01）。而在BBD干预后,Western Blot实验结果显示相对于TGF-β1组,BBD可下调N-cadherin、p-Smad2/3的表达（P<0.05或P<0.01）,对Smad2/3的表达无影响（P>0.05）。Q-PCR结果显示相对于TGF-β1组,BBD可下调N/E-cadherin mRMA的比值（P<0.01）。Transwell实验结果显示,与对照组相比,TGF-β1能够提高细胞迁移能力和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）;而BBD可以逆转这一作用（P<0.01）。体内实验:（1）裸鼠皮下移植瘤实验显示BBD抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P<0.01）,但对裸鼠体重无影响（P>0.05）。（2）Q-PCR结果显示BBD组中E-cadherin的mRNA表达无改变（P>0.05）,而N-cadherin的表达下调（P<0.05）,同时N/E-cadherin的比值下调（P<0.05）;Western Blot实验结果显示BBD组中E-cadherin的蛋白表达显着上调（P<0.01）,Vimentin、MMP2、MMP9、p-Smad2/3的蛋白表达下调（P<0.05或P<0.01）,而N-cadherin、Twist1、ZEB1、ZEB2、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达没有改变（P>0.05）。（3）HE实验结果显示BBD对裸鼠无肝、肾毒性结论:在体外,BBD能够抑制胃癌细胞的迁移、侵袭和粘附能力。在体外,BBD能够抑制胃癌细胞的EMT转化和TGF-β/Smad信号通路的活化并可以通过抑制TGF-β/Smad通路介导的EMT,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。BBD在体内可抑制胃癌细胞的增殖,抑制其EMT转化和TGF-β/Smad信号通路的活化。
姜超[9]（2020）在《CSNK2A1，CD51在胃癌中的作用及机制的研究》文中研究说明研究目的:胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在所有恶性肿瘤中居第五位,死亡率居第三位。东亚地区尤其是中国,胃癌的发病率最高。胃癌发病通常无特异性的早期症状,尽管有多种检查手段,但由于早期非侵入性检测技术的局限性,如CT、MRI、PET和血清学监测（CEA,CA19-9,CA125和CA72-4）敏感性低,而内窥镜检查普及率低,通常在转移发生后或处于晚期时才诊断为胃癌。即使在早期诊断并根治性的进行了手术切除,其局部出现复发和远处出现转移的机率仍然很高。尽管术后监测工具在不断的增多和进步,包括内窥镜监测（胃镜等）,血清学监测（CEA,CA19-9,CA125和CA72-4）,影像学检测（CT,MRI,PET等）,但敏感性尚未达到预期。手术治疗,新辅助化疗,辅助化疗,放疗等治疗方式虽然延长了患者的生存期,但胃癌的异质性强,25%-40%的胃癌患者在治疗后会发生复发转移。治疗后出现复发和转移是胃癌治疗过程中的一大挑战。胃癌细胞的广泛侵袭和转移,特别是难以控制的远隔脏器的转移成为导致胃癌出现高复发率和高致死率的主要原因。近年来临床上为有效的消除肿瘤转移灶而采用了多种辅助治疗方法,但最终难以大幅提高晚期胃癌患者的缓解率和总体生存率。出现转移的胃癌患者预后很差,中位生存时间大约一年。癌细胞的侵袭、转移是由多个步骤组成的复杂过程。因此,深入研究胃癌发生侵袭、转移的分子机制,获得高敏感性和高特异性的肿瘤标志物和/或治疗靶点,对于及早发现、及早诊断并及早治疗胃癌的转移灶,进而提高晚期胃癌患者的生存期具有重要的理论和临床意义。酪蛋白激酶II（Casein kinase II,CSNK2）是一种多效丝氨酸/苏氨酸激酶,可磷酸化数百种底物并参与多种细胞过程,包括细胞周期调节,DNA复制和修复,发育和分化,转录,细胞信号传导,致癌作用和凋亡等。CSNK2具有形成稳定异四聚体的两个催化亚基（a）和两个调节亚基（β）,是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,参与细胞生物学的各个方面,并且具有的靶标超过300个。CSNK2具有两种催化亚基,即CK2 α和CK2 α’,分别由CSNK2A1和CSNK2A2编码。CSNK2A1在恶性肿瘤细胞中的表达和激酶活性高于正 常对应细胞,并且已有证据表明CSNK2A1在乳腺癌,肺癌,肾癌,结直肠癌和前列腺癌中起着致癌作用。CSNK2A1的阳性表达在上述多种肿瘤中预示了较短的总生存期和无进展生存期。CD51（整联蛋白αv,integrin V）不仅是负责细胞与基质结合的跨膜糖蛋白,还是恶性肿瘤许多信号转导途径中的关键角色。研究证实,CD51在喉癌、下咽癌、前列腺癌、乳腺癌,肺癌,肾癌等恶性肿瘤中高表达,并与恶性生物学行为存在相关性。在结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）中,CD51过表达与晚期TNM分期存在相关性。研究显示CSNK2A1在非小细胞肺癌中,CD51在CRC中可通过转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）作用于上皮细胞-间充质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响肿瘤细胞的迁移和侵袭。我们前期研究证实同一批胃癌标本上CSNK2A1和CD51的表达存在一致性。但是,CSNK2A1、CD51在胃癌中的表达情况如何?两者之间关系、表达情况与生物学行为及生存是否存在相关性,值得深入研究。基于上述原因,本课题检测了 CSNK2A1和CD51在胃癌组织标本中的表达情况;进而分析了其表达与临床病理特征及生存的关系;研究了其表达与侵袭、转移的相关性及作用机制。研究方法:第一部分:1.选取40例胃腺癌组织及其相对应的癌旁组织蜡块连续切取石蜡切片;选取250例的胃肿瘤石蜡组织（其中240例为胃腺癌,10例为胃胃肠间质瘤）制成组织芯片。2.免疫组化染色检测了 40例胃腺癌组织及其相对应的癌旁组织中CSNK2A1和CD51的表达情况;统计学分析CSNK2A1和CD51的表达在胃腺癌组织及相对应的癌旁组织之间的差异性;两者表达水平之间的相关性。3.免疫组化染色检测了组织芯片中CSNK2A1的表达情况。4.统计学分析CSNK2A1表达与性别、年龄、发病部位、分化程度、肿瘤大小、浸润深度（T分期）、淋巴结转移（N分期）、远处转移（M分期）、TNM分期、吸烟、饮酒等相关临床病理参数的关系。5.结合患者随访资料,分析CSNK2A1表达与患者生存的相关性;采用COX比例风险模型进行单因素和多因素分析患者总生存期,分析CSNK2A1表达是否是独立预后因素。第二部分:1.蛋白质印迹法（Western blot）和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测 4 种胃癌细胞系（SGC790,SNU216,BGC823和HGC27）和1种正常胃上皮细胞系（GES-1）中CSNK2A1的表达情况。2.构建了过表达CSNK2A1的细胞系和敲低表达CSNK2A1的细胞系,同时构建相对应的阴性对照细胞系。4种细胞系平行进行后续实验研究。3.增殖实验:CCK8法研究胃癌细胞在CSNK2A1过表达和敲低表达后的第1,3,5,7天细胞生长曲线变化,以进一步研究CSNK2A1表达对胃癌细胞增殖能力的影响。4.克隆形成能力实验:平板克隆形成实验检测胃癌细胞CSNK2A1过表达和敲低表达后克隆形成能力的变化。5.迁移和侵袭实验:（1）划痕实验研究CSNK2A1表达对胃癌细胞迁移能力的影响。（2）细胞Transwell迁移、侵袭实验研究CSNK2A1的过表达及敲降对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。第三部分:1.验证胃癌细胞中CSNK2A1表达与EMT的关系。（1）Western blot 实验检测 EMT 中相关转录因子 E-cadherin、N-cadherin、Vinmentin在CSNK2A1的过表达及敲低表达的胃癌细胞系中的表达情况。（2）免疫荧光染色实验检测EMT中相关转录因子E-cadherin、N-cadherin在CSNK2A1的过表达及敲低表达的胃癌细胞系中的表达情况。2.探索性研究CSNK2A1通过PI3K-Akt-mTOR信号通路对胃癌细胞的侵袭转移的影响。（1）Western blot 检测 PI3K-Akt-mTOR 信号通路中 p-Akt S473、p-Akt t308、p-mTOR在CSNK2A1的过表达及敲低表达的胃癌细胞系中的表达情况。（2）Western blot检测使用PI3K抑制剂（ly294002）处理了的过表达CSNK2A1的 SNU216-Flag-CSNK2A1 细胞中 CSNK2A1、p-Akt S473/T308、p-mTOR 的表达情况。CCK8法检测其对增殖能力的影响程度。Transwell迁移、侵袭实验检测其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。研究结果:第一部分:1.CSNK2A1在胃腺癌组织中的高表达率为25%（10/40）,在相对应的癌旁组织中为7.5%（3/40）,差异有统计学意义（P=0.034）。结果表明CSNK2A1在胃腺癌组织中的表达水平高于相应的癌旁组织。CD51无论是染色强度还是阳性细胞占比在胃腺癌组织及其相对应的癌旁组织中均强表达,无法进行差异性比较。此结果最终显示CD51与CSNK2A1在胃腺癌中的表达无相关性。2.我们在大样本（组织芯片）中继续研究CSKN2A1的表达及其临床病理意义。CD51不再进行研究。在240例胃腺癌标本中,59例（24.58%）高表达CSNK2A1,181例（75.42%）低表达CSNK2A1。CSNK2A1在胃胃肠间质瘤中不表达（0/6）（其中4例在免疫组化过程中发生脱片）。3.CSNK2A1高表达与胃腺癌的分化程度、浸润深度（T分期）、淋巴结转移（N分期）和TNM分期显着相关,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。4.240例胃腺癌患者的术后1,3,5年总生存期（overall survival,OS）分别为82.50%,56.67%,39.17%。CSNK2A1低表达的胃腺癌术后患者比高表达的患者具有明显延长的生存期,差异有统计学意义（P=O.002）。5.单因素COX分析结果显示免疫反应评分（Immunoreactive score,IRS）、发病部位、分化程度、肿瘤大小、浸润深度（T分期）、淋巴结转移（N分期）、远处转移（M分期）、TNM分期是胃腺癌术后患者的不良预后因素（P<0.05）。多因素COX分析结果显示IRS（P=0.001）、浸润深度（T分期）（P<0.001）、淋巴结转移（N分期）（P<0.001）、TNM分期（P<0.001）是独立不良预后因素。第二部分:1.Western blot和qRT-PCR实验结果:4个胃癌细胞系的CSNK2A1表达均高于胃上皮细胞细胞系（P<0.01）。CSNK2A1的表达在SGC790细胞中最高,在SNU216细胞中最低。2.选择低表达CSNK2A1的细胞系SNU216,构建了过表达CSNK2A1的细胞系SNU216-Flag-CSNK2A1;选择高表达CSNK2A1的细胞系SGC790,构建了敲低表达CSNK2A1的细胞系SGC790-KD-CSNK2A1,同时分别构建了阴性对照细胞系（SNU216-control 和 SGC790-control）。3.CCK8实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1在第1,3,5,7天时吸光度值（OD值）均明显高于 SNU216-control（P 值均<0.001）。SGC790-KD-CSNK2A1 在第 1,3,5,7天时OD值均明显低于SGC790-control（P值均<0.001）。以上的实验结果提示CSNK2A1的表达能够促进人胃癌细胞株的增殖。4.平板克隆形成实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1形成细胞克隆数较SNU216-control 明显增多（P<0.001）。SGC790-KD-CSNK2A1 形成细胞克隆数较SGC790-control明显减少（P<0.001）。以上的实验结果提示CSNK2A1的表达能够提高人胃癌细胞株的克隆形成能力。5.划痕实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1的迁移能力较SNU216-control升高（P<0.05）。SGC790-KD-CSNK2A1 的迁移能力较 SGC790-control 明显降低（P<0.01）。以上的实验结果提示CSNK2A1的表达能够提高胃癌细胞的迁移能力。6.细胞Transwell迁移、侵袭实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1的迁移、侵袭能力较SNU216-control明显升高（P<0.001）。SGC790-KD-CSNK2A1 组细胞的迁移、侵袭能力较SGC790-control组明显减弱（P<0.001）。以上的实验结果提示CSNK2A1的表达能够提高人胃癌细胞株的细胞迁移、侵袭能力。第三部分:1.Western blot 实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1 的 N-cadherin 和 Vinmentin表达较 SNU216-control 增高;E-cadherin 表达较 SNU216-control 减弱（P 值均<0.05）。SGC790-KD-CSNK2A1 的 N-cadherin 和 Vinmentin 表达较SGC790-control 减弱;E-cadherin 表达较 SGC790-control 增高（P 值均<0.05）。免疫荧光染色实验结果:SNU216-Flag-CSNK2A1的N-cadherin表达较SNU216-control增高;E-cadherin 表达较 SNU216-control 减弱。SGC790-KD-CSNK2A1 的 N-cadherin 表达较 SGC790-control减弱;E-cadherin表达较SGC790-control增高。以上的实验结果显示:在CSNK2A1过表达的调节下,EMT转化过程中的上皮细胞标志因子E-cadherin的减少,间质细胞标志因子N-cadherin和Vimentin的增多,标志着EMT的发生,在一定程度上预示着胃癌转移的开始。该部分研究验证了 EMT是CSNK2A1影响人胃癌细胞株的细胞迁移、侵袭能力的信号途径之一。2.Western blot实验结果:CSNK2A1过表达时,Akt和mTOR磷酸化水平升高,而当CSNK2A1敲低时,Akt和mTOR磷酸化水平降低。提示CSNK2A1可能通过PI3K-Akt-mTOR信号通路的激活,影响后续作用。ly294002降低了信号通路下游分子（p-Akt S473/T308,p-mTOR）的表达水平。Transwell迁移和侵袭实验表明,CSNK2AI增强了胃癌细胞的迁移和侵袭能力,但ly294002逆转了 CSNK2AI的这个效应。为了排除增殖对迁移和侵袭的可能影响,进行了 CCK-8实验,分析结果表明ly294002抑制了细胞增殖约1.5倍。这种减少不能解释ly294002抑制迁移和侵袭的巨大差异（大约低3到4倍）。这些发现表明CSNK2A1通过PI3K-Akt-mTOR途径促进胃癌的增殖,迁移和侵袭。研究结论:1.CSNK2A1在胃癌组织中高表达。CSNK2AI的高表达与分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期存在相关性。CSNK2AI是胃癌术后患者的独立不良预后因素。CD51在胃癌中是无效指标。2.CSNK2A1的表达可以促进胃癌细胞的增殖、克隆形成,增强其迁移和侵袭能力。3.CSNK2A1通过EMT、PI3K-Akt-mTOR信号途径促进胃癌细胞的迁移和侵袭。
唐傲霜[10]（2020）在《地西他滨联合阿帕替尼对人胃癌细胞株SNU-1的Reprimo基因表达的实验研究》文中研究指明目的:恶性肿瘤是除心血管疾病外严重威胁人类身体健康的疾病之一。其中,胃癌在全球的发病率排名第四,在恶性肿瘤中致死率仅次于肺癌。抑癌基因Reprimo与胃癌的恶性生物学行为有着密切联系。本实验旨在利用地西他滨联合阿帕替尼两种药物对人胃腺癌细胞中Reprimo基因表达的影响,探讨两药单独或联合作用是否能改变Reprimo基因表达状态,对Reprimo基因的进一步研究提供实验依据。方法:1.胃腺癌细胞株SNU-1至培养良好后随机分为生理盐水组、地西他滨组、阿帕替尼组和联合用药组,各组细胞经药物处理24小时后,通过光学显微镜观察各组细胞分别经过处理后的形态变化和增殖情况,并测定各组细胞在450nm处的吸光度明确细胞受抑制情况。2.采用RT-PCR法检测各组细胞经药物单独或联合作用24小时后SNU-1细胞株中Reprimo基因mRNA表达水平。3.Western Blotting法测各组细胞经药物干预24小时后Reprimo蛋白表达状态的变化。结果:与对照组相比,地西他滨联合阿帕替尼组对胃癌细胞株SNU-1抑制作用最明显,差异有统计学价值（P<0.05）;用RT-PCT检测mRNA表达时,经过地西他滨组作用后,mRNA表达水平较对照组明显升高,其次为两组药物联合作用（P<0.05）;Western Blotting法检测Reprimo蛋白经单用地西他滨、单用阿帕替尼组和联合组作用后蛋白表达均有不同程度升高,其中联合组作用最明显。结论:1.地西他滨联合阿帕替尼在抑制人胃腺癌SNU-1细胞增殖时可能发挥协同作用。2.地西他滨、阿帕替尼单独作用时均有可能恢复人胃腺癌细胞SNU-1抑癌基因Reprimo的蛋白表达,两种联合作用时效果较单一药物作用明显。
二、INTERACTIONS BETWEEN THE HUMAN GASTRIC CARCINOMA CELL AND THE HUMAN VASCULAR ENDOTHELIAL CELL（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、INTERACTIONS BETWEEN THE HUMAN GASTRIC CARCINOMA CELL AND THE HUMAN VASCULAR ENDOTHELIAL CELL（论文提纲范文）
（1）含铜胺氧化酶1（AOC1）在胃癌进展中的作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 第2章 方法 |
| 2.1 化学药品及试剂 |
| 2.2 材料、设备及软件 |
| 2.3 组织样本收集、处理及检测 |
| 2.3.1 患者及组织样本收集 |
| 2.3.2 组织样本处理 |
| 2.3.3 RNA分离和q RT-PCR检测 |
| 2.3.4 总蛋白提取和western blot |
| 2.4 细胞系培养及构建 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 AOC1 敲低细胞系的构建 |
| 2.4.3 AOC1 过表达细胞系的构建 |
| 2.4.4 AOC1 敲低/过表达细胞系的检测 |
| 2.5 细胞及分子实验方法 |
| 2.5.1 CCK-8实验 |
| 2.5.2 克隆形成实验 |
| 2.5.3 Transwell实验 |
| 2.5.4 细胞凋亡检测 |
| 2.5.5 数据统计与分析 |
| 2.6 转录组高通量测序 |
| 2.6.1 样品处理及检测 |
| 2.6.2 信息分析流程 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 AOC1 在胃癌临床组织样本中的表达模式 |
| 3.1.1 GEPIA在线数据库分析AOC1 在人胃癌组织中的m RNA表达水平 |
| 3.1.2 q RT-PCR检测AOC1 在人临床胃癌组织样本中的m RNA表达水平 |
| 3.1.3 Western blot检测AOC1 在人临床胃癌组织样本中的蛋白表达水平 |
| 3.2 AOC1 表达下调对胃癌细胞恶性增殖和侵袭的影响 |
| 3.2.1 敲低AOC1 在胃癌细胞系AGS和 MKN45 中的表达水平 |
| 3.2.2 AOC1 表达下调抑制了AGS和 MKN45 细胞的增殖和生长 |
| 3.2.3 AOC1 表达下调诱导了AGS和 MKN45 细胞的凋亡 |
| 3.2.4 AOC1 调控凋亡相关蛋白表达 |
| 3.2.5 AOC1 表达下调抑制了AGS和 MKN45 细胞的迁移和侵袭 |
| 3.2.6 AOC1 表达下调抑制了AGS和 MKN45 细胞的EMT过程 |
| 3.3 AOC1 过表达对胃癌细胞恶性增殖和侵袭的影响 |
| 3.3.1 AOC1 在胃癌细胞系AGS中过表达 |
| 3.3.2 AOC1 过表达促进了AGS细胞的增殖和生长 |
| 3.3.3 AOC1 过表达抑制了AGS细胞的凋亡 |
| 3.3.4 AOC1 过表达促进了AGS细胞的迁移和侵袭 |
| 3.4 AOC1 通过激活AKT信号通路,调控胃癌细胞行为 |
| 3.4.1 AOC1 激活AKT信号通路 |
| 3.4.2 AOC1 通过激活AKT信号通路参与对胃癌细胞生物学功能的调节 |
| 3.5 AOC1 过表达胃癌细胞的高通量转录组测序 |
| 3.5.1 测序数据统计 |
| 3.5.2 参考基因组比对分析 |
| 3.5.3 表达水平分析 |
| 3.5.4 差异表达分析 |
| 3.5.5 SNP检测 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 AOC1 表达以及作为疾病生物标志物的潜力 |
| 4.2 AOC1 是否仅作为二胺氧化酶参与胃癌细胞生物学功能的调控 |
| 4.3 AOC1 参与胃癌细胞生物学功能调控的分子机制 |
| 4.4 AOC1 的表达调控 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 综述 AOC1与含铜胺氧化酶 |
| 参考文献 |
（2）早期肿瘤行为片上建模研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肿瘤现状 |
| 1.2 肿瘤发生与发展 |
| 1.3 肿瘤分类 |
| 1.4 传统肿瘤研究模型 |
| 1.4.1 二维培养模型 |
| 1.4.2 三维培养模型 |
| 1.4.3 动物模型 |
| 1.5 新兴肿瘤研究模型 |
| 1.5.1 原发肿瘤芯片 |
| 1.5.2 转移肿瘤芯片 |
| 1.5.3 肿瘤芯片的应用 |
| 1.6 本文选题意义和研究内容 |
| 1.6.1 本文选题意义 |
| 1.6.2 本文研究内容 |
| 第2章 血管芯片的构建 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与实验仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 芯片设计与制作 |
| 2.3.2 细胞与细胞外基质 |
| 2.3.3 血管生成实验 |
| 2.3.4 血管出芽实验 |
| 2.3.5 免疫荧光染色 |
| 2.3.6 细胞骨架染色 |
| 2.3.7 图像采集与分析 |
| 2.4 理论建模 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 片上流速分布 |
| 2.5.2 片上微血管网络的形成 |
| 2.5.3 片上微血管网络的特征 |
| 2.5.4 细胞密度对血管生成的影响 |
| 2.5.5 流动对血管生成的影响 |
| 2.5.6 片上血管出芽 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 基于血管芯片的原发肿瘤早期发展研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 芯片设计与制作 |
| 3.3.2 细胞及细胞培养 |
| 3.3.3 细胞外基质制备 |
| 3.3.4 肿瘤球制备 |
| 3.3.5 细胞和肿瘤球加载 |
| 3.3.6 免疫荧光染色 |
| 3.3.7 细胞骨架染色 |
| 3.3.8 ELISA实验 |
| 3.3.9 肿瘤生长分析 |
| 3.3.10 肿瘤周围血管表征 |
| 3.3.11 细胞因子加载实验 |
| 3.3.12 数据分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 片外HeLa细胞球的生长过程 |
| 3.4.2 片外HeLaF细胞球的生长过程 |
| 3.4.3 片上原发肿瘤的构建 |
| 3.4.4 血管生成对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.5 成纤维细胞对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.6 成纤维细胞因子对早期肿瘤行为的影响 |
| 3.4.7 肿瘤发展对肿瘤周围血管的影响 |
| 3.4.8 肿瘤细胞上皮间质转化 |
| 3.4.9 血管生成拟态 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 基于血管芯片的转移肿瘤早期研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 芯片设计与制作 |
| 4.3.2 细胞与细胞外基质 |
| 4.3.3 片上细胞加载 |
| 4.3.4 乳腺癌细胞灌注 |
| 4.3.5 片上细胞活性分析 |
| 4.3.6 免疫荧光染色 |
| 4.3.7 细胞骨架染色 |
| 4.3.8 微血管灌注实验 |
| 4.3.9 ELISA实验 |
| 4.3.10 数据分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 片上细胞分布 |
| 4.4.2 片上微血管网络特征 |
| 4.4.3 乳腺癌细胞内渗 |
| 4.4.4 乳腺癌细胞外渗 |
| 4.4.5 乳腺癌细胞定植 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 常用缩略词 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（3）内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 胃癌现状概述 |
| 1.1.1 胃癌概述 |
| 1.1.2 胃癌的治疗现状 |
| 1.2 ADAM28概述 |
| 1.2.1 ADAM28的结构 |
| 1.2.2 ADAM28与肿瘤 |
| 1.3 vWF概述 |
| 1.4 肿瘤微环境概述 |
| 1.5 研究目的、内容、创新点和意义 |
| 1.5.1 研究目的 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究创新点和意义 |
| 第2章 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株 |
| 2.1.2 常用试剂 |
| 2.2 仪器和设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 细胞瞬时转染 |
| 2.3.3 SDS-PAGE蛋白凝胶电泳和蛋白免疫印迹实验(Western Blot) |
| 2.3.4 细胞中总RNA的提取及反转录PCR |
| 第3章 ADAM28在胃癌中的表达情况和预后研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 细胞株 |
| 3.2.2 主要药品和试剂 |
| 3.2.3 主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 数据库分析 |
| 3.3.2 Western Blot检测胃癌细胞系中ADAM28的蛋白表达水平 |
| 3.3.3 qPCR检测胃癌细胞系中ADAM28 mRNA的表达水平 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 基于TCGA数据库的胃癌发展与ADAM28表达关系分析 |
| 3.4.2 ADAM28在胃癌细胞系中表达上调 |
| 3.4.3 胃癌中ADAM28与vWF蛋白表达水平呈负相关 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 体外实验研究胃癌来源ADAM28对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡能力的调控作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 细胞株 |
| 4.2.2 主要药品和试剂 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 构建ADAM28敲低和过表达质粒 |
| 4.3.2 划痕实验检测胃癌来源ADAM28对胃癌细胞迁移的影响 |
| 4.3.3 胃癌来源ADAM28对胃癌细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 流式细胞术检测胃癌来源ADAM28对胃癌细胞凋亡水平的影响 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 ADAM28 shRNA质粒或ADAM28过表达质粒在胃癌细胞中敲低效率或过表达效率验证 |
| 4.4.2 胃癌来源ADAM28促进胃癌细胞的迁移能力 |
| 4.4.3 胃癌来源ADAM28促进胃癌细胞的增殖能力 |
| 4.4.4 胃癌来源ADAM28敲低能够促进胃癌细胞的凋亡 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 胃癌来源ADAM28调控胃癌细胞凋亡的分子机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 细胞株 |
| 5.2.2 主要药品和试剂 |
| 5.2.3 主要仪器设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 转染ADAM28 shRNA和ADAM28 pcDNA之后胃癌细胞中vWF的蛋白表达水平 |
| 5.3.2 构建vWF表达敲低质粒 |
| 5.3.3 Western Blot检测vWF敲低效率 |
| 5.3.4 流式细胞术检测敲低vWF的表达对胃癌细胞凋亡水平的影响 |
| 5.3.5 Western Blot检测vWF及下游相关蛋白表达水平 |
| 5.3.6 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 胃癌来源的ADAM28调节vWF的表达 |
| 5.4.2 vWF敲低不诱导胃癌细胞凋亡 |
| 5.4.3 胃癌来源的ADAM28切割vWF从而消除vWF诱导的胃癌细胞凋亡 |
| 5.5 讨论 |
| 第6章 内皮来源ADAM28调控内皮细胞凋亡及其分子机制 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 细胞株 |
| 6.2.2 主要药品和试剂 |
| 6.2.3 主要仪器设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 6.3.2 Western Blot检测凋亡蛋白的表达 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 内皮来源的ADAM28调节vWF的表达 |
| 6.4.2 vWF敲低不诱导内皮细胞凋亡 |
| 6.4.3 内皮来源的ADAM28切割vWF从而消除vWF诱导的内皮细胞凋亡 |
| 6.5 讨论 |
| 第7章 体外实验研究共培养体系中内皮来源ADAM28对胃癌细胞凋亡能力的调控作用 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料 |
| 7.2.1 细胞株 |
| 7.2.2 主要药品和试剂 |
| 7.2.3 主要仪器设备 |
| 7.3 实验方法 |
| 7.3.1 转染ADAM28 shRNA和ADAM28 pcDNA之后内皮细胞中ADAM28的蛋白表达水平检测 |
| 7.3.2 HUVEC与胃癌细胞共培养体系 |
| 7.3.3 流式细胞术检测敲低和过表达内皮细胞中ADAM28的表达对胃癌细胞凋亡的影响 |
| 7.3.4 Western Blot检测共培养体系中胃癌细胞凋亡相关蛋白表达 |
| 7.4 实验结果 |
| 7.4.1 内皮细胞中ADAM28敲低和过表达效率验证 |
| 7.4.2 内皮来源的ADAM28能够抑制共培养系统中胃癌细胞的凋亡 |
| 7.5 讨论 |
| 第8章 共培养体系中内皮来源ADAM28调控胃癌细胞凋亡的分子机制研究 |
| 8.1 引言 |
| 8.2 实验材料 |
| 8.2.1 细胞株 |
| 8.2.2 主要药品和试剂 |
| 8.2.3 主要仪器设备 |
| 8.3 实验方法 |
| 8.3.1 ELISA检测共培养体系中细胞上清vWF的表达 |
| 8.3.2 Western Blot检测vWF及相关蛋白的表达水平 |
| 8.3.3 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 8.4 实验结果 |
| 8.4.1 上室HUVEC的ADAM28敲低会增加共培养体系中vWF的分泌 |
| 8.4.2 内皮来源ADAM28可裂解vWF从而抑制vWF诱导的胃癌细胞凋亡 |
| 8.5 讨论 |
| 第9章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间论文和专利发表情况 |
（4）长五肽PTX3在胃癌乳斑转移中相关作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分PTX3在胃癌组织及细胞系中的表达以及与肿瘤相关巨噬细胞表达相关性 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 胃癌组织芯片 |
| 1.2 胃癌及癌旁组织 |
| 1.3 细胞系 |
| 1.4 实验主要试剂 |
| 1.5 仪器及耗材 |
| 2.细胞培养 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 生物信息学统计分析 |
| 3.2 胃癌组织样本获取及免疫组化 |
| 3.3 细胞及组织总RNA的提取 |
| 3.4 实时定量qRT-PCR |
| 3.5 组织及细胞蛋白提取 |
| 3.6 Western-blot实验 |
| 4.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.PTX3在胃癌中的表达情况 |
| 1.1 TCGA数据分析 |
| 1.2 胃癌及癌旁组织中PTX3表达 |
| 1.3 胃癌细胞系与正常胃粘膜上皮细胞中PTX3的表达差异 |
| 2.胃癌组织中不同水平PTX3表达下M1巨噬细胞及M2巨噬细胞表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 探讨PTX3对胃癌细胞上皮间充质转化过程及胃癌干性影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要材料 |
| 2.主要实验方法 |
| 2.1 细胞冻存与复苏 |
| 2.2 PTX3上调质粒(PTX3)瞬时转染胃癌细胞 |
| 2.3 迁移、侵袭实验 |
| 2.4 胃癌细胞总蛋白提取及定量 |
| 2.5 Western-blot实验 |
| 2.6 细胞总RNA提取 |
| 2.7 实时定量qRT-PCR |
| 2.8 胃癌细胞成球实验 |
| 2.9 小鼠异种移植实验 |
| 2.9.1 上调PTX3稳定细胞株的构建与筛选 |
| 2.9.2 裸鼠皮下肿瘤种植 |
| 2.9.3 HE染色和免疫组化 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.上调PTX3对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响 |
| 2.上调PTX3对胃癌细胞上皮间充质转化过程的影响 |
| 3.上调PTX3对胃癌细胞成球能力影响 |
| 4.上调PTX3对胃癌细胞干性指标影响 |
| 5.过表达PTX3抑制胃癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 体外实验探讨胃癌细胞PTX3对乳斑转移环境中巨噬细胞极化影响及相关机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要材料 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 人单核细胞THP-1的培养 |
| 2.2 CCK8细胞活性检测 |
| 2.3 巨噬细胞的分化 |
| 2.4 外源性重组PTX3(rhPTX3)的使用 |
| 2.5 PTX3上调质粒(PTX3)瞬时转染胃癌细胞 |
| 2.6 胃癌细胞与巨噬细胞共培养体系构建 |
| 2.7 流式细胞术检测 |
| 2.8 免疫荧光实验 |
| 2.9 胃癌细胞总蛋白提取及定量 |
| 2.10 Western-blot实验 |
| 2.11 细胞总RNA提取 |
| 2.12 实时定量qRT-PCR |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.外源性重组PTX3对THP-1细胞活性测定 |
| 2.外源性重组PTX3对M2巨噬细胞极化影响 |
| 3.体外模拟胃癌乳斑转移环境下,胃癌细胞中PTX3对巨噬细胞极化影响 |
| 4.PTX3抑制M2型巨噬细胞极化相关机制研究 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 体内实验研究上调PTX3在小鼠乳斑胃癌转移中相关作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.主要材料 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 胃癌细胞(MFCs)的冻存与复苏 |
| 2.2 MFCs上调PTX3稳定细胞株的构建与筛选 |
| 2.3 胃癌大网膜乳斑转移模型的建立 |
| 2.4 组织免疫荧光 |
| 2.5 免疫组织化学染色 |
| 3.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.PTX3过表达慢病毒表达载体感染MFC细胞 |
| 2.过表达PTX3抑制小鼠腹膜内胃癌细胞向乳斑区的定植转移 |
| 3.过表达PTX3抑制乳斑区巨噬细胞M2 极化,促进向M1极化 |
| 4.过表达PTX3抑制乳斑区LGR5表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 PTX3在肿瘤及炎症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 Casticin对胃癌发展的影响 |
| 1.1 绪论 |
| 1.1.1 胃癌 |
| 1.1.2 胃癌的发生与转移 |
| 1.1.3 紫花牡荆素(Casticin) |
| 1.2 主要实验材料 |
| 1.2.1 细胞株 |
| 1.2.2 主要实验试剂 |
| 1.2.3 主要实验仪器 |
| 1.2.4 药物配制 |
| 1.3 主要实验方法 |
| 1.3.1 CCK-8检测 |
| 1.3.2 细胞克隆检测 |
| 1.3.3 DAPI染色检测 |
| 1.3.4 FITC-Annexin V/PI染色检测 |
| 1.3.5 细胞周期检测 |
| 1.3.6 细胞划痕检测 |
| 1.3.7 Transwell侵袭实验 |
| 1.3.8 qRT-PCR检测Casticin对MMP-2/9表达的影响 |
| 1.3.9 Western blotting检测Casticin对MMP-2/9蛋白表达的影响 |
| 1.3.10 明胶酶谱检测Casticin对MMP-2/9活性的影响 |
| 1.3.11 统计与分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 Casticin抑制胃癌细胞增殖 |
| 1.4.2 Casticin抑制胃癌细胞克隆形成 |
| 1.4.3 Casticin诱导胃癌细胞凋亡 |
| 1.4.4 Casticin诱导胃癌细胞周期阻滞 |
| 1.4.5 Casticin抑制胃癌细胞迁移 |
| 1.4.6 Casticin抑制胃癌细胞侵袭 |
| 1.4.7 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9 mRNA表达 |
| 1.4.8 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9蛋白表达 |
| 1.4.9 不同浓度Casticin抑制胃癌细胞MMP-2/9活性 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 Casticin通过下调MMP-2/9的表达抑制胃癌细胞侵袭转移的分子机制 |
| 2.1 绪论 |
| 2.1.1 基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs) |
| 2.1.2 MMPs和RECK的关系 |
| 2.1.3 DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase 1,DNMT1) |
| 2.1.4 蛋白磷酸酶2A (Protein Phosphatase 2A,PP2A) |
| 2.1.5 丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(Mitogen-activated extracellularsignal-regulated kinase,MEK) |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.2.4 药物配制 |
| 2.3 主要实验方法 |
| 2.3.1 si-RECK瞬时转染 |
| 2.3.2 过表达RECK瞬时转染 |
| 2.3.3 Western blotting检测 |
| 2.3.4 qRT-PCR检测 |
| 2.3.5 BSP检测基因启动子甲基化状态 |
| 2.3.6 统计与分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 Casticin通过消除胃癌细胞中RECK甲基化抑制MMP-2/9表达 |
| 2.4.2 PP2A表达增强可削弱RECK甲基化状态,进而促进RECK表达 |
| 2.4.3 Casticin通过促进PP2A的表达来抑制MEK活化和DNMT1的表达,进而抑制MMP-2/9表达 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 利用胃癌裸鼠成瘤模型评价Casticin的抑癌效果 |
| 3.1 绪论 |
| 3.1.1 肿瘤 |
| 3.1.2 胃癌 |
| 3.1.3 Casticin的抗肿瘤作用 |
| 3.2 主要实验材料 |
| 3.2.1 细胞株 |
| 3.2.2 试剂 |
| 3.2.3 仪器 |
| 3.3 主要实验方法 |
| 3.3.1 皮下成瘤 |
| 3.3.2 免疫组化检测 |
| 3.3.3 Western blotting检测 |
| 3.3.4 统计与分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Casticin对体内胃癌肿瘤的抑制作用 |
| 3.4.2 Casticin可增强移植瘤小鼠体内PP2A/RECK的表达,抑制MMP-2/9表达 |
| 3.4.3 Casticin可增强移植瘤小鼠体内PP2A/RECK蛋白表达,抑制MMP-2/9蛋白表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 综述 RECK基因与侵袭性癌的发展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其它研究成果 |
| 致谢 |
（6）新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中药抗胃癌基础研究现状与进展 |
| 1 中药有效成分基础研究 |
| 2 单味中药基础研究 |
| 3 复方基础研究 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 胃癌相关miRNA研究现状与展望 |
| 1 miRNA在胃癌发生发展中的作用研究 |
| 2 miRNA在胃癌诊断治疗中的作用研究 |
| 3 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 新加良附方及薯蓣皂苷元抑制胃癌细胞功能作用及机制研究 |
| (一) 新加良附方抑制人胃癌细胞功能实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (二) 薯蓣皂苷元抑制人胃癌细胞功能实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (三) 新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| (四) 新加良附方及薯蓣皂苷元调控miR-34a抗胃癌作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 新加良附方及薯蓣皂苷元对裸鼠胃癌移植瘤抑制作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（7）胡桃楸中胡桃醌的提取及抗肿瘤活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 胡桃楸概述 |
| 1.1.1 胡桃楸的应用价值 |
| 1.1.2 胡桃楸的药理作用 |
| 1.2 胡桃醌概述 |
| 1.2.1 胡桃醌的药理作用 |
| 1.3 胃癌概述 |
| 1.3.1 胃癌的发病机制 |
| 1.3.2 胃癌治疗的发展现状 |
| 第2章 胡桃楸中胡桃醌的提取、分离纯化及鉴定 |
| 2.1 原料来源 |
| 2.1.1 原植物形态 |
| 2.1.2 原料采集 |
| 2.2 实验仪器及试剂 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 试剂与材料 |
| 2.3 胡桃楸中胡桃醌的提取 |
| 2.3.1 胡桃醌的提取工艺优化 |
| 2.3.2 单因素实验结果 |
| 2.3.3 正交试验优选最佳工艺 |
| 2.4 胡桃醌的分离纯化 |
| 2.5 胡桃醌的鉴定 |
| 第3章 最适敏感细胞株的筛选及转录组学技术筛选差异表达基因 |
| 3.1 实验仪器及试剂 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 试剂与材料 |
| 3.1.3 细胞株 |
| 3.2 CCK-8法筛选最适敏感细胞株 |
| 3.2.1 样品液配制 |
| 3.2.2 细胞培养 |
| 3.2.3 CCK-8测定细胞存活率 |
| 3.2.4 实验结果 |
| 3.3 转录组学技术筛选差异表达基因 |
| 3.3.1 RNA转录组检测样品制备、保存及运输 |
| 3.3.2 高通量测序与生物信息学分析 |
| 3.3.3 结果 |
| 第4章 胡桃醌对人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡相关基因P53蛋白表达水平的影响 |
| 4.1 实验仪器及试剂 |
| 4.1.1 实验仪器 |
| 4.1.2 试剂与材料 |
| 4.1.3 细胞株 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 胡桃醌样品溶液的制备 |
| 4.2.3 CCK-8法测定细胞存活率 |
| 4.2.4 Western-blot方法 |
| 4.2.5 RT-PCR检测p53 mRNA表达水平 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 胡桃醌对人胃癌细胞(SGC-7901)存活率的影响 |
| 4.3.2 凋亡相关基因蛋白表达水平检测结果 |
| 4.3.3 胡桃醌对人胃癌细胞(SGC-7901)p53 mRNA表达的影响 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 |
（8）基于TGF-β/Smad通路探讨八宝丹抑制胃癌细胞上皮-间质转化的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 实验材料和方法 |
| 1 细胞株和动物 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 动物 |
| 2 药物、试剂耗材、仪器设备 |
| 2.1 药物 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 药物、主要试剂的配制方法 |
| 3.1.1 八宝丹(BBD)的配制 |
| 3.1.2 细胞完全培养基的的配制 |
| 3.1.3 5×电泳液的配制 |
| 3.1.4 1×湿转转膜液的配制 |
| 3.1.5 4 %多聚甲醛溶液的配制 |
| 3.2 细胞实验 |
| 3.3 动物实验 |
| 4 统计学处理和数据分析 |
| 实验结果 |
| 1 BBD抑制胃癌细胞AGS和 MGC80-3 的转移能力 |
| 1.1 BBD对 AGS和 MGC80-3 迁移能力的影响 |
| 1.2 BBD对 AGS和 MGC80-3 侵袭能力的影响 |
| 1.3 BBD对 AGS和 MGC80-3 粘附能力的影响 |
| 2 BBD抑制EMT相关基因mRNA和蛋白的表达 |
| 3 BBD抑制TGF-β/Smad信号通路的活化 |
| 4 BBD抑制TGF-β1 诱导的TGF-β/Smad信号通路活化,并抑制EMT及细胞迁移、侵袭能力 |
| 5 BBD抑制裸鼠皮下移植瘤的生长 |
| 6 BBD抑制裸鼠皮下移植瘤细胞EMT和 TGF-β/Smad信号通路的活化 |
| 7 BBD对裸鼠无肝、肾毒性 |
| 讨论 |
| 问题和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）CSNK2A1，CD51在胃癌中的作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 CSNK2A1、CD51在胃癌组织中的表达及临床意义 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 CSNK2A1表达对胃癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第三部分 CSNK2A1表达在胃癌侵袭转移中机制的初步探讨 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文Ⅰ |
| 英文论文Ⅱ |
（10）地西他滨联合阿帕替尼对人胃癌细胞株SNU-1的Reprimo基因表达的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词英文索引 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 实验材料及方法 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、INTERACTIONS BETWEEN THE HUMAN GASTRIC CARCINOMA CELL AND THE HUMAN VASCULAR ENDOTHELIAL CELL（论文参考文献）
- [1]含铜胺氧化酶1（AOC1）在胃癌进展中的作用及分子机制研究[D]. 徐芬. 南昌大学, 2021(01)
- [2]早期肿瘤行为片上建模研究[D]. 李成盼. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [3]内皮和胃癌来源的ADAM28对胃癌细胞凋亡的调控作用及机制研究[D]. 尹倩茹. 华东理工大学, 2021
- [4]长五肽PTX3在胃癌乳斑转移中相关作用研究[D]. 崔新野. 大连医科大学, 2021(01)
- [5]紫花牡荆素抑制胃癌细胞迁移与侵袭的机制研究[D]. 阳帆. 南方医科大学, 2020(06)
- [6]新加良附方调控miR-34a/SIRT1/p53及Caspase凋亡通路抑制胃癌的机制研究[D]. 李亚. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]胡桃楸中胡桃醌的提取及抗肿瘤活性研究[D]. 王若汗. 长春工业大学, 2020(01)
- [8]基于TGF-β/Smad通路探讨八宝丹抑制胃癌细胞上皮-间质转化的作用机制[D]. 刘建鑫. 福建中医药大学, 2020(08)
- [9]CSNK2A1，CD51在胃癌中的作用及机制的研究[D]. 姜超. 山东大学, 2020(08)
- [10]地西他滨联合阿帕替尼对人胃癌细胞株SNU-1的Reprimo基因表达的实验研究[D]. 唐傲霜. 南华大学, 2020(01)