一、人心肌梗死心肌肌钙蛋白T脱失的免疫组化观察（论文文献综述）
刘淼[1]（2020）在《右上肢缺血预处理对经右侧桡动脉途径冠状动脉介入术后患者桡动脉闭塞的影响及其机制》文中研究表明研究背景:冠状动脉造影技术一直被认为是诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病的金标准。自1989年Campeau介绍经桡动脉途径冠状动脉造影技术和1993年Kiemeneij介绍了经桡动脉途径冠状动脉介入治疗技术以来,桡动脉途径逐渐被认为是心脏导管技术的主要入路点。大量的临床研究表明经桡动脉途径冠状动脉造影明显优于经股动脉途径冠状动脉造影,主要表现在:第一、有更少的术后并发症;第二、患者具有更好的手术耐受性;第三、患者住院时间相对更短,患者住院费用相对要少。因此经桡动脉途径经皮冠状动脉造影技术更受广大心内科介入手术医师及患者的欢迎。然而经桡动脉途径仍然具有不利于患者的术后并发症,其中最主要的是桡动脉闭塞症。桡动脉闭塞多数是无症状不易被发现的,因为手掌部接受双重供血。然而桡动脉一旦闭塞,将会限制将来再次进行经桡动脉途径冠状动脉造影术,限制冠状动脉旁路移植术和血液透析患者导管瘘等操作的执行。因此辨别并避免桡动脉闭塞的危险因素、增加有益因素和预防及抑制桡动脉闭塞事件的发生非常重要。经桡动脉途径冠状动脉造影术后桡动脉闭塞有两个主要的发病机制:血栓形成和血管内膜增生。经桡动脉途径冠状动脉造影技术可导致血管内膜损伤,桡动脉血管内皮平滑肌细胞功能紊乱,使血流介导的血管舒张功能降低。桡动脉CT扫描和血管内超声等检查以及组织功能研究表明桡动脉插管后桡动脉结构和功能发生重要改变。如果桡动脉鞘管直径超过桡动脉内径,桡动脉内皮层可能会受到严重破坏。这种内皮损伤是血流介导的血管舒张功能的降低的重要原因,同时也是内皮增生和桡动脉闭塞的关键因素。目前关于缺血预处理的研究是一个热点问题,主要是缺血预处理对靶器官及组织的保护效应。目前研究的范围较广,由最早的远端缺血预处理对心脏的保护效应到肝脏、肺脏、脑、肾等组织器官的保护效应均有研究。关于缺血预处理保护组织器官的作用机制的研究也越来越多,主要是神经内分泌的激活,引起机体释放一些体液保护因子,从而对机体产生抗炎、抗血小板聚集、保护血管内皮功能等作用。因此,我们设想缺血预处理可能对距离处理位点最近的动脉血管有一定的保护作用,我们以观察经桡动脉途径经皮冠状动脉造影术后桡动脉闭塞为出发点,研究缺血预处理对桡动脉闭塞的影响,以及桡动脉闭塞的危险因素。研究目的:1.缺血预处理对桡动脉闭塞的影响;2.识别桡动脉闭塞的危险及保护因素;3.观察缺血预处理对桡动脉闭塞的远期影响。研究方法:1.选取2017年9月至2018年4月我院首次行选择性冠状动脉造影且诊断为急性冠状动脉综合征的患者。我们根据预实验结果估算本研究单组所需最低样本量为290例,我们连续入选了 755例行选择性冠状动脉造影和介入治疗的患者;最终,322例患者在冠状动脉造影前接受缺血预处理并入组,318例患者入未行缺血预处理组。有115例患者因不符合入组标准,符合排除标准而被排除。入选患者根据其住院号的奇数或偶数被随机分为缺血预处理组（IC）和非缺血预处理组（non-IC）,2.签订同意行经桡动脉途径冠状动脉造影术知情同意书和同意进行该临床研究的知情同意书;3.所有患者术前均进行桡动脉直径测量。根据手术顺序,给予缺血预处理组患者行缺血预处理,用水银血压计将袖带绑在右上臂,给予加压至200mmHg,持续约5min,然后释放,持续约5min,共4个循环。4.经桡动脉途径冠状动脉造影术:给予双重抗血小板药物治疗,阿司匹林300mg,氯吡格雷600mg或者替格瑞洛180mg.根据患者手术顺序,患者依次送入导管室行冠状动脉造影介入治疗。常规选取右侧桡动脉作为冠状动脉造影首选入径血管,桡动脉穿刺点选取距离桡骨茎突2-3cm,搏动最强点,用2%利多卡因局麻,以20G穿刺针采用Seldinger技术进行桡动脉血管穿刺,穿刺成功见回血后沿穿刺针送入导丝,沿导丝置入动脉鞘管,经鞘管侧孔给予普通肝素至少3000U,如有需要术者根据患者情况及公斤体重酌情增加剂量（普通肝素100IU/kg）。冠状动脉血管成形术应用6F指引导管,术后立即拔除桡动脉鞘管。5.术后均用标准的旋压式动脉压迫止血带进行压迫止血,以刚能触到桡动脉搏动为标准,每1.5-2小时左右给予压迫止血带减压1圈直至完全减压。6.术后第二天行桡动脉B超,查看患者桡动脉通畅情况;7.记录桡动脉缺血结束至行经桡动脉途径冠状动脉造影时间,术前桡动脉直径,围手术期间患者用药,研究患者年龄,性别以及病史,检验指标等因素。8.随访9.所有数据采用SPSS 23.0统计软件进行处理。连续变量正态分布计量资料均采用均数±标准差来表示,分类记数资料用百分率表示。连续变量资料使用独立样本T检验进行比较。计数资料比较使用卡方检验。对影响桡动脉闭塞的因素建立Logistic回归模型,来分析识别桡动脉闭塞的各项危险因素及其对桡动脉闭塞的影响;P<0.05表示差异具有统计学意义。研究结果:1.缺血预处理组与非缺血预处理组临床资料的比较缺血预处理组共322例患者,术后24小时有3位发生桡动脉闭塞,闭塞率为0.93%;非缺血预处理组共318例患者,术后24小时有14例患者出现桡动脉闭塞,闭塞率为4.4%;两组比较,缺血预处理组桡动脉闭塞率明显降低,P=0.006.2.早期桡动脉闭塞危险因素分析桡动脉闭塞组β受体阻滞剂应用率明显低于非桡动脉闭塞组（41%&69%,P=0.014）;桡动脉闭塞组曲美他嗪应用率明显低于非桡动脉闭塞组（17.6%&49.1%,p=0.01）;桡动脉闭塞组桡动脉内径明显小于非桡动脉闭塞组（2.31 ±0.53&2.59±0.47,P=0.015）;桡动脉闭塞组缺血预处理率明显低于非桡动脉闭塞组（17.6%%51.2%,p=0.006）.3.早期桡动脉闭塞的独立危险因素将桡动脉内径,缺血预处理,β受体阻滞剂,曲美他嗪等放入多元Logistic回归模型,结果显示桡动脉内径小为冠状动脉造影术后早期桡动脉闭塞的独立危险因素。缺血预处理及β受体阻滞剂是桡动脉闭塞的保护因素。4.随访术后约第650天左右随访时发现,缺血处理组与非缺血处理组两组桡动脉内径较术前均明显减小。缺血处理组随访前后桡动脉内径比P=0.024;非缺血预处理组随访前后桡动脉内径比之P=0.047。约术后890天左右再次随访上次现场随访患者,两次随访桡动脉内径未见明显差异。研究结论:缺血预处理可能有益于降低经桡动脉途径冠状动脉介入治疗术后24小时内桡动脉闭塞率。桡动脉内径小,是冠状动脉造影术后24小时桡动脉闭塞的独立危险因素。缺血预处理以及β受体阻滞剂的应用可能是桡动脉闭塞的保护因素。经皮冠脉介入治疗可能会导致术后桡动脉内径一定程度的减小。背景经桡动脉途径冠脉介入治疗因其更少的术后并发症、减少患者住院时间、降低患者住院费用、增加患者术后舒适度等优势被广大术者及患者所接受,但经桡动脉途径冠脉介入治疗方法可导致桡动脉血管损伤,主要涉及以下4个方面:1.桡动脉内径与鞘管大小之间的关系在桡动脉急性损伤中起重要作用;2.桡动脉穿刺引起桡动脉内膜撕裂;3.鞘管的拉伸效应和鞘管本身的通过;4.导管在插入和撤出桡动脉的过程中桡动脉痉挛。手术过程中对桡动脉的损伤可引起相应的并发症,如穿刺部位的出血、缺血、血肿、假性动脉瘤、动静脉瘘等,其中最重要是桡动脉闭塞。桡动脉闭塞的原因主要是桡动脉损伤后诱发桡动脉内原位血栓形成及桡动脉内中膜增生。肢体缺血预处理即多数文献提及的远端缺血预处理,其实施过程是通过对血压袖带进行充气,压力达到阻断肢体动脉血流得目的并持续几分钟,然后将血压袖带放气使得肢体血流再通并持续几分钟,如此反复几个循环。其作用过程使得神经内分泌激活,促使机体释放保护性因子,最终起到改善血管内皮功能、抗炎、抗血小板聚集、抗氧化应激、甚至抗细胞凋亡等效果,进而发挥其保护缺血再灌注组织器官的作用。我们的临床观察研究发现肢体缺血预处理可能有助于降低桡动脉闭塞率,但其机制不明。目的本研究旨在探讨肢体缺血预处理降低经桡动脉途径冠脉介入治疗术后桡动脉闭塞的可能机制。通过动物模型模拟经桡动脉途径冠脉介入治疗过程对桡动脉的损伤过程,研究缺血预处理对兔股动脉经机械损伤后机体反应的影响。方法将24只新西兰大白兔分为4组,分别为正常对照组（Control）:不进行缺血预处理,不进行股动脉穿刺,第一天采血5ml,第二天采血5ml后解剖兔右侧股动脉。缺血预处理组（IC）:对兔右侧下肢进行缺血预处理,不对股动脉穿刺。缺血预处理后第二天解剖兔右侧股动脉,缺血处理前及解剖前分别采血5ml;单纯股动脉穿刺组（P）:对兔右侧股动脉单纯进行股动脉穿刺留鞘。第二天解剖右侧穿刺留鞘股动脉,股动脉穿刺前及解剖前分别采血5ml;缺血预处理+股动脉穿刺组（ICP）:对兔右下肢进行缺血预处理,1.5小时后进行股动脉穿刺留鞘,第二天行穿刺股动脉解剖,缺血预处理前及股动脉解剖前分别采血5ml。对血液标本离心并分装,检测兔穿刺留鞘前后血浆中血管性血友病因子（vWF）、E选择素、P选择素、组织型纤溶酶原激活剂（tPA）、纤溶酶原激活剂抑制物（PAI-1）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）等。留取损伤血管组织,并观察损伤血管的病理变化及血管内皮PI3K/AKT/eNOS通路蛋白的表达。结果1.各组兔右侧股动脉内径及基础血浆指标的比较:术前四组兔右侧股动脉内径组间比较采用单因素方差分析,显示四组间无显着差异（p>0.05）。各组干预前兔血清vWF、P选择素、E选择素、tPA、PAI-1、NO、ET、TNF-a、IL-6、IL-10 水平无显着差异。2.各组处理前后血浆指标的比较。正常对照组与单纯缺血预处理组比较,血浆vWF、P选择素、ET-1、tPA、PAI-1、IL-6、IL-10、TNF-a 水平两组间无显着差异,但血浆NO水平在缺血预处理组明显升高。血浆vWF、P选择素、E选择素、PAI-1、IL-10、ET-1水平在单纯股动脉穿刺留鞘组和缺血预处理+股动脉穿刺留鞘组均明显升高。vWF、PAI-1两组间升高幅度无显着差异。缺血预处理组+股动脉穿刺留鞘组术后血浆P选择素、ET-1术后水平升高幅度显着低于单纯股动脉穿刺留鞘组。血浆IL-6、TNF-a水平在单纯股动脉穿刺留鞘组术后较术前明显升高,两者血浆水平在缺血预处理+股动脉穿刺留鞘组术后较术前未见显着差异,且两指标在缺血预处理+股动脉穿刺留鞘组术后升高值显着低于单纯股动脉穿刺留鞘组。血浆tPA水平在单纯股动脉穿刺留鞘组和缺血预处理组+股动脉穿刺留鞘组均显着降低,两组间血浆tPA水平术后较术前降低幅度无显着差异。血浆NO水平在单纯股动脉穿刺留鞘组术后较术前显着降低,其在缺血预处理+股动脉穿刺留鞘组术后较术前无显着差异,且血浆NO水平在缺血预处理组+股动脉穿刺留鞘组降低幅度显着低于单纯股动脉穿刺留鞘组。3.病理结果:1)HE染色对照组及缺血预处理组HE染色显示兔股动脉内膜完整,弹力膜连续,内皮细胞清晰可见;股动脉穿刺组和缺血预处理组+股动脉穿刺组兔股动脉,内皮细胞部分脱失,内膜连续性中断,弹力膜断裂明显,且部分存在中膜变性。2)免疫组化检测四组血管内皮PI3K、AKT、eNOS的表达情况。单纯缺血预处理组与正常对照组相比,发现缺血预处理组血管内皮P13K、AKT、eNOS表达明显增强;缺血预处理组+股动脉穿刺留鞘组与单纯股动脉穿刺留鞘组相比血管内皮P13K、AKT、eNOS表达明显增强。结论抗炎、改善内皮功能、调节黏附分子的释放可能是缺血预处理抑制血栓形成,进而影响桡动脉闭塞率的作用机制。缺血预处理通过PI3K/AKT/eNOS蛋白通路调节血管内皮释放NO进而发挥其作用。
刘炎[2]（2020）在《Circ-RHOJ.1竞争性抑制miR-124-3p调控NRG-1影响心肌缺血/再灌注损伤的机制研究》文中进行了进一步梳理目的心肌缺血再灌注（Ischemia/Reperfusion,I/R）损伤指发生于心肌梗死后,血流再灌注时出现心肌损伤加重的现象。心肌I/R损伤是心功能障碍和心肌细胞死亡的主要原因。非编码RNA广泛参与调控心肌I/R损伤介导的心肌细胞凋亡过程,而环状RNA（Circular RNAs,circRNAs）作为结构稳定、表达丰度高的一类非编码RNA,其潜在参与心肌I/R损伤的分子机制目前尚不完全清楚。探索心肌I/R损伤的潜在新病理机制,预防、减少心肌I/R损伤是目前临床亟待解决的重要问题。实验方法第一部分:提取大鼠乳鼠原代心肌细胞,采用心肌肌钙蛋白T（cTnT）抗体,应用细胞免疫荧光（Immunofluorescence,IF）方法鉴定SD大鼠心肌细胞。随后,对原代心肌细胞进行体外I/R处理,采用实时定量PCR（qPCR）方法检测 circ-RHOJ.1、miR-124-3p 和神经调节蛋白 1（neuregulin-1,NRG-1）的 RNA表达水平;同时,使用蛋白质免疫印迹法（Western blot,WB）和IF法检测NRG-1的蛋白表达水平与细胞定位。进一步构建大鼠体内心肌I/R损伤模型,提取心肌细胞与处理心脏组织,再次采用qPCR验证circ-RHOJ.1、miR-124-3p与NRG-1的RNA表达水平;同时,应用心脏组织免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）染色评估NRG-1在心肌I/R损伤组织中的蛋白表达水平。第二部分:采用生物信息学预测miR-124-3p与circ-RHOJ.1以及miR-124-3p和NRG-1的潜在结合位点,应用双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-124-3p与circ-RHOJ.1 以及 miR-124-3p 和 NRG-1 的相互作用。第三部分:采用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法和流式细胞术检测过表达circ-RHOJ.1和应用miR-124-3p抑制剂对心肌I/R损伤后心肌细胞增殖活性和凋亡率的影响。同时,采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测细胞因子IL2、IL6、IL10和TNF-α表达水平,从而评估炎症反应的程度。实验结果第一部分:大鼠乳鼠提取的原代心肌细胞高表达cTnT,此方法能成功分离心肌细胞。大鼠原代心肌细胞体外I/R处理后表达circ-RHOJ.1的RNA水平与NRG-1的mRNA和蛋白水平显着下调,而miR-124-3p的RNA表达水平显着升高。而且,体内心肌I/R损伤的模型提取的心肌细胞,circ-RHOJ.1、miR-124-3p和NRG-1的表达与体外心肌细胞I/R损伤后的表达模式相符。第二部分:生物信息学软件预测miR-124-3p与circ-RHOJ.1以及miR-124-3p和NRG-1分别具有1个潜在的结合位点。双荧光素酶报告基因实验显示miR-124-3p 能分别与 circ-RHOJ.1 和 NRG-1 结合。Circ-RHOJ.1 可以作为miR-124-3p的海绵体,NRG1是miR-124-3p的靶基因。第三部分:过表达Circ-RHOJ.1或抑制miR-124-3p的表达可显着增加心肌I/R损伤后抗炎因子IL10和减少促炎因子IL2、IL6和TNF-α在损伤心肌细胞中的表达水平。功能学实验结果显示,抑制miR-124-3p的表达或过表达circRHOJ.1可以增强心肌I/R损伤后心肌细胞的增殖活性,抑制心肌细胞凋亡。结论Circ-RHOJ.1可以增强心肌I/R损伤后的心肌细胞的增殖活性,并抑制心肌细胞的凋亡;其机制是通过竞争性抑制miR-124-3p调控NRG-1表达。Circ-RHOJ.1可以作为心肌I/R损伤的分子标志物。
毕海涛[3]（2013）在《早期心肌缺血死后诊断的法医学应用研究》文中进行了进一步梳理心源性猝死（sudden cardiac death，SCD）系指由于心脏原因所致的突然、意外的自然死亡，占成人猝死原因的首位。在引发SCD的原因中，急性心肌缺血（acute myocardial ischemia，AMI）是最主要的原因，由于短暂的（冠状动脉痉挛）或持续的（冠状动脉闭塞）的急性心肌缺血后，冠状动脉血流量降低，心肌氧等物质供应不足，代谢产物清除减少，引起心脏电生理活动紊乱和/或心肌机械收缩功能障碍，导致大多数病人常在发病后6小时内死亡，甚至1h内死亡。心肌缺血后至少需要6小时在HE染色下才会出现光镜的形态学改变（如凝固性坏死、多灶性心肌纤维波浪样变、核固缩、收缩带坏死、炎细胞浸润等）。而在法医学实践中，早期心肌缺血（early myocardial ischemia, EMI）猝死者多在心肌缺血发生后6小时内死亡，死后常规检查除可见冠状动脉及其分支存在不同程度的动脉粥样硬化外，由缺血性损伤因素所致的病理形态学改变极难检出，使早期心肌缺血的死后诊断成为法医病理学鉴定的难点。多年来国内外学者都在寻找敏感、稳定、实用的诊断早期心肌缺血的方法和指标，从常规HE染色、特殊染色和酶组织化学、免疫组织化学、超微结构、荧光检查、离子含量改变、心包液和血液心肌损伤标志物检测、死后影像学检查等方面进行了积极的探索，所有这些方法都从不同方面、不同程度地丰富了EMI死后诊断的内容。但是上述方法或因为操作过于复杂，或实用性不强，或因为缺乏特异性、费用过高等因素的影响而限制了它们在法医病理学中的应用，实际应用价值各家说法不一，迄今仍没有敏感、实用的方法或指标能很好解决实际办案中的死因诊断问题。在众多研究方法中，免疫组织化学因其具有特异性强、敏感性高、实用性好等优点，已应用到EMI的研究和应用中来。近年来，许多学者陆续报道了如肌动蛋白（actin）、肌钙蛋白、心型脂肪酸结合蛋白（heart typefatty acid binding protein, H-FABP）、抗肌萎缩蛋白等蛋白分子在急性心肌缺血时从心肌细胞内脱失的现象；血浆中某些蛋白成分如补体成分、纤维连接蛋白（fibronectin, Fn）等在缺血心肌的异常分布情况；缺血心肌诱导表达某些敏感蛋白分子，如缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1alpha, HIF-1α）、血管内皮生长因子等。这些研究从多角度观察了急性心肌缺血时心肌细胞发生的各种变化，部分指标在EMI心脏标本进行了验证，但考虑到缺血心肌自身演变的特点和法医学实践中案例的复杂性和特殊性，单一方法和单一检测指标的应用缺乏说服力而难以有效发挥其诊断价值，而以往这些研究为多指标联合应用提供了理论依据。同时，考虑到法医检案的特殊性，如EMI发病时间、尸体保存情况、固定时间等因素的影响，需针对不同的情况进行检测指标的组合，以期达到最好的诊断效果。据此，本课题以大鼠急性心肌缺血模型和法医检案心脏标本作为研究对象，研究：①对比观察铁钒-苏木素-伊红染色法（Heidenhain染色）、变色酸2R-亮绿染色和苏木素-碱性复红-苦味酸染色（HBFP染色）对缺血心肌的染色能力，观察不同保存条件及10%福尔马林固定时间对染色的影响；②从不同角度选取检测指标：心肌结构蛋白或胞浆蛋白：actin（HHF35）、H-FABP、S100A1；黏附和进入心肌细胞内的血浆成分：C5b-9、Fn；缺血心肌诱导表达的产物：聚集素蛋白（clusterin，CLU）、HIF-1α、HIF-2α、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（adisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin type1motifs，ADAMTS-1），观察大鼠急性心肌缺血后血浆S100A1含量的变化及9个诊断指标在大鼠急性缺血心肌中的表达变化情况；③观察不同保存条件及10%福尔马林固定时间对上述9个免疫组织化学检测指标染色的影响；④以法医病理检案心脏标本进行印证，观察检测指标表达情况、阳性率及特异性，为EMI猝死案例的法医病理学诊断提供客观依据。第一部分三种组织化学特殊染色在早期心肌缺血死后诊断中的应用和比较目的：对比观察Heidenhain染色、变色酸2R-亮绿染色和HBFP染色对急性缺血心肌的染色能力，观察不同保存条件及10%福尔马林固定时间对染色结果的影响。方法：采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型，实验动物190只，雌雄不拘，体重250300g，随机分为正常对照组（5只）、假手术组（5只）、心肌缺血组（根据缺血时间不同分为急性心肌缺血15min、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h组共8个亚组，每组5只）、-20℃保存组、4℃保存组、室温保存组（大鼠急性心肌缺血6h心脏标本根据在三个保存条件下保存时间不同又分为保存1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d组共7个亚组，每组5只）和固定时间组（大鼠急性心肌缺血6h心脏标本根据10%福尔马林固定时间不同又分为固定3d、5d、7d、14d、21d、28d、42d组共7个亚组，每组5只）。建立Heidenhain染色、变色酸2R-亮绿染色及HBFP染色三种组织化学特殊染色方法观察各组染色结果。结果：1大鼠急性心肌缺血15min，Heidenhain染色、变色酸2R-亮绿染色及HBFP染色均可在缺血区左心室心内膜下及乳头肌处见小灶状心肌细胞阳性着色，随缺血时间延长，阳性着色面积进一步扩大，三种组织化学特殊染色阳性着色部位一致。2缺血心脏标本-20℃、4℃和室温保存过程中，随保存时间的延长，三种组织化学特殊染色均出现染色能力下降，阳性面积缩小的趋势，-20℃和4℃保存28d、室温保存21d后，Heidenhain染色效果优于另两种组织化学特殊染色，尤其显示收缩带坏死效果突出。3缺血心脏标本10%福尔马林固定42d后，Heidenhain染色效果好于另两种组织化学特殊染色，大片状缺血心肌细胞成阳性着色，与周边非缺血区边界清晰。小结：Heidenhain染色较变色酸2R-亮绿染色和HBFP染色可操作性强、敏感性高、死后变化及长时间固定影响小，可作为法医学实践中EMI死后诊断首选的组织化学特殊染色方法。第二部分大鼠急性心肌缺血多指标免疫组织化学检测目的：观察大鼠急性心肌缺血后不同时间点血浆S100A1含量变化及心肌细胞内actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1的表达敏感性及变化规律。方法：1采用ELISA法检测大鼠急性心肌缺血后不同时间点血浆S100A1含量。2采用Western blot检测大鼠急性心肌缺血后不同时间点缺血心肌ADAMTS-1蛋白的表达3采用免疫组织化学方法观察大鼠急性缺血后不同时间点心肌细胞内actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1的表达敏感性及变化规律。结果：1大鼠急性心肌缺血15min后血浆S100A1含量与假手术组相比明显升高（P<0.05），且随着缺血时间的延长，血浆S100A1含量逐渐升高，至缺血6h时达到高峰。2大鼠急性心肌缺血15min后缺血区心肌细胞内ADAMTS-1蛋白表达与假手术组相比明显升高（P<0.05），且随着缺血时间的延长，ADAMTS-1蛋白的表达逐步升高，至缺血6h时达到高峰。3大鼠急性心肌缺血后不同时间点免疫组织化学结果①actin（HHF35）、H-FABP、S100A1：对照组心肌细胞呈现较均匀一致的棕黄色阳性染色，急性心肌缺血15min后actin（HHF35）、H-FABP和S100A1三种蛋白在缺血区左心室心内膜下及乳头肌可见小灶性心肌细胞胞浆缺染，随缺血时间的延长，缺染范围逐渐扩大，自心内膜向心外膜发展，缺血4h三种蛋白缺染扩展至近心肌全层，与周边非缺血区阳性着色的心肌细胞界限清晰。在各缺血组三种蛋白缺染位置基本一致。②ADAMTS-1、CLU：对照组心肌细胞阴性表达，急性心肌缺血15min缺血区心内膜浅层及乳头肌散在心肌细胞出现阳性表达，随着缺血时间的延长，阳性范围逐渐扩大，缺血4h缺血区心肌细胞片状阳性表达，阳性着色扩展至近心外膜，CLU缺血4h时表达达高峰，ADAMTS-1缺血6h时表达达高峰③C5b-9、HIF-1α：对照组及急性心肌缺血15min组心肌细胞呈阴性表达，缺血30min时在缺血区心内膜浅层及乳头肌散在心肌细胞出现阳性表达，随着缺血时间的延长，阳性范围逐渐扩大，缺血4h缺血区心肌细胞片状阳性表达，阳性着色扩展至近心外膜，缺血6h时表达达高峰。④HIF-2α：对照组、急性心肌缺血15min和30min组心肌细胞呈阴性表达，缺血1h后，缺血区心内膜浅层及乳头肌散在心肌细胞出现阳性表达，随着缺血时间的延长，阳性范围逐渐扩大，缺血5h缺血区大部分心肌细胞表达阳性，阳性着色扩展至近心外膜，表达达高峰。⑤Fn：对照组、急性心肌缺血15min和30min组心肌细胞呈阴性着色，缺血1h缺血区心内膜下浅层及乳头肌毛细血管腔内血浆出现阳性反应，缺血2h后缺血区心内膜下浅层及乳头肌心肌细胞出现Fn阳性着色，血管腔内血浆及血管壁阳性着色，随着缺血时间的延长，阳性着色范围逐渐扩大，缺血6h达到高峰。小结：大鼠急性心肌缺血15min actin（HHF35）、H-FABP和S100A1即可出现缺失，ADAMTS-1和CLU蛋白出现阳性表达；C5b-9和HIF-1α在大鼠急性心肌缺血30min出现阳性表达；HIF-2α在大鼠急性心肌缺血1h出现阳性表达；Fn在大鼠急性心肌缺血2h出现阳性着色。随缺血时间的延长，actin（HHF35）、H-FABP和S100A1蛋白染色缺失愈加明显，而C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1蛋白则阳性着色逐渐增强。第三部分不同保存条件及10%福尔马林固定时间对急性心肌缺血免疫组织化学诊断指标的影响目的：观察三种保存条件：-20℃、4℃和室温及10%福尔马林固定时间对第二部分观察的9个免疫组织化学诊断指标染色的影响。方法：采用免疫组织化学方法观察不同保存条件及10%福尔马林固定时间对急性缺血心肌细胞内actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1表达变化的影响。结果：1不同保存条件对免疫组织化学诊断指标染色的影响：①室温保存对目的蛋白免疫组织化学染色的影响最大，4℃保存其次，-20℃保存影响最轻。②大鼠急性心肌缺血心脏标本在-20℃、4℃及室温条件下保存，actin（HHF35）、H-FABP及S100A1抗原稳定性最差，只限于对-20℃和室温保存1天、4℃保存3天标本有诊断意义。③C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α、ADAMTS-1均显示出良好的抗原稳定性，其中CLU稳定性最好，可适用于三个保存条件下28d以内心脏标本的检测；C5b-9相对稳定性最差，适用于-20℃保存28d、4℃保存21d、室温保存14d以内标本，且保存不同时间后，非缺血区心肌细胞均未见出现假阳性干扰结果判断。210%福尔马林固定时间对免疫组织化学诊断指标染色的影响：随固定时间的延长，各指标免疫组织化学阳性染色强度有下降的趋势，尤以缺血区中央明显，固定42d时，各候选指标免疫组织化学阳性染色仍清晰可辨，缺血区与非缺血区免疫组织化学染色分界清晰。小结：actin（HHF35）、H-FABP及S100A1抗原稳定性最差，只限于对-20℃和室温保存1天、4℃保存3天标本有诊断意义。C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α、ADAMTS-1均显示出良好的抗原稳定性，其中CLU稳定性最好，可适用于三个保存条件下28d以内心脏标本的检测；C5b-9相对稳定性最差，适用于-20℃保存28d、4℃保存21d、室温保存14d以内标本。9个诊断指标均可用于10%福尔马林固定42d以内的心脏组织标本的检测。第四部分免疫组织化学诊断指标在人体尸检心脏标本的检测目的：将9个免疫组织化学诊断指标在法医病理检案心脏标本上进行印证，观察检测指标的诊断价值、阳性率及特异性。方法：实验分为正常对照组（10例）、明确心肌梗死组（10例）、疑似心肌梗死组（10例）、其他案例组（23例，包括机械性窒息、电击死、失血性休克、一氧化碳中毒、病毒性心肌炎），采用免疫组织化学方法观察各组心脏标本actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1的表达情况。结果：1正常对照组心肌细胞actin（HHF35）、H-FABP和S100A1呈现较为均匀一致阳性表达，而明确心肌梗死组、疑似心肌梗死组和其他案例组均可见actin（HHF35）、H-FABP和S100A1呈片状或弥漫性、灶状染色缺失。明确心肌梗死组、疑似心肌梗死组和其他案例组actin（HHF35）、H-FABP和S100A1缺染阳性率高于正常对照组，但三组之间无明显差异。2正常对照组和失血性休克案例心肌细胞内C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1均呈阴性表达，明确心肌梗死组和大部分疑似心肌梗死组案例心肌细胞可见C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α、ADAMTS-1阳性表达。而机械性窒息部分案例可见HIF-1α和HIF-2α阳性表达，电击死部分案例可见Fn阳性表达，一氧化碳中毒部分案例可见C5b-9、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1阳性表达，病毒性心肌炎案例可见C5b-9、Fn、CLU和ADAMTS-1阳性表达。明确心肌梗死组和疑似心肌梗死组6个诊断指标的阳性率明显高于正常对照组和其他案例组。小结：actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1共9个诊断指标在急性心肌梗死人体心脏标本上得到了印证，其中actin（HHF35）、H-FABP和S100A1诊断特异性最差，不宜单独使用进行EMI的死后诊断，C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1诊断价值良好，但在其他非梗死性的直接或间接引起心肌损害的案例，如机械性窒息、电击死、一氧化碳中毒、心肌炎等中也有表达，将多个诊断指标联合应用将提高EMI死后诊断正确率。结论：本研究从法医病理学实用角度出发，采用大鼠急性心肌缺血模型和人体尸检心脏标本作为研究对象，系统地观察了三种组织化学特殊染色和9个免疫组织化学诊断指标在急性心肌缺血6小时内死后诊断的敏感性、实用性和特异性，得出以下结论：1Heidenhain染色较变色酸2R-亮绿染色和HBFP染色可操作性强、敏感性高、死后变化及10%福尔马林固定时间影响小，可作为法医学实践中早期心肌梗死死后诊断首选的组织化学特殊染色方法。2大鼠急性心肌缺血15min actin（HHF35）、H-FABP和S100A1即可出现缺失，ADAMTS-1和CLU蛋白出现阳性表达；C5b-9和HIF-1α在大鼠急性心肌缺血30min出现阳性表达；HIF-2α在大鼠急性心肌缺血1h出现阳性表达；Fn在大鼠急性心肌缺血2h出现阳性着色。随缺血时间的延长，actin（HHF35）、H-FABP和S100A1蛋白染色缺失愈加明显，而C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1蛋白则阳性着色逐渐增强。3actin（HHF35）、H-FABP及S100A1稳定性最差，只限于对-20℃和室温保存1天、4℃保存3天标本有诊断意义。C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α、ADAMTS-1均显示出良好的稳定性，其中CLU稳定性最好，可适用于三个保存条件下28d以内心脏标本的检测；C5b-9相对稳定性最差，适用于-20℃保存28d、4℃保存21d、室温保存14d以内标本。9个诊断指标可用于10%福尔马林固定42d以内的心脏组织标本的检测。4actin（HHF35）、H-FABP、S100A1、C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-19个诊断指标在EMI人体心脏标本上得到了印证，其中actin（HHF35）、H-FABP和S100A1诊断特异性最差，不宜单独使用进行EMI的死后诊断，C5b-9、Fn、CLU、HIF-1α、HIF-2α和ADAMTS-1特异性强、敏感性高，诊断价值良好，但在其他非梗死性的直接或间接引起心肌损害的案例中也有表达，将多个诊断指标联合应用将提高EMI死后诊断正确率。综上，本研究阐明了组织化学特殊染色和9个免疫组化诊断指标在心肌缺血的染色变化规律、影响因素、相互关系和应用条件，为早期心肌梗死死后诊断确立了较完善的病理形态学指标系统。
王东进[4]（2011）在《生脉注射液诱导心肌组织内干细胞分化与体外循环心肌保护》文中认为以往认为,心脏为终末分化器官,其细胞本身不具有增殖分化功能,因此无法修复损伤心肌。但随着细胞生物学技术的进步以及人们研究的深入,心脏中存在心肌干细胞（CSC）的观念已经越来越多地为医学工作者们所接受。本研究将含不同浓度生脉注射液的培养基用于培养心肌组织来源细胞,观察该药能否在体外诱导心肌组织内干细胞分化,并通过临床试验进一步证实生脉注射液具有减轻心肌缺血-再灌注损伤的作用,同时探讨其体外循环心肌保护作用是否与诱导心肌组织内干细胞分化存在关联。第一部分生脉注射液促进人心肌组织内干细胞分化为心肌细胞的体外实验目的：成功培养人心肌组织来源细胞,尝试提取人CSC,观察生脉注射液是否具有诱导干细胞分化的作用,为后期的临床研究奠定基础；方法：选择行心脏手术的病人,将术中切除的心肌组织保留,用组织块消化法提取细胞,通过体外扩增后用免疫磁珠法分选人心肌组织来源干细胞,并尝试用不同浓度生脉注射液干预细胞,利用免疫荧光的方法检测心肌特异性转录因子和心肌特异性蛋白,进一步验证生脉注射液的诱导干细胞分化作用；结果：从人心肌组织中成功提取细胞,并在体外扩增,但未能成功分选人CSC,免疫荧光法证实5μl/ml和10μl/ml生脉注射液可以诱导心肌组织内干细胞分化,浓度增大后诱导效率稍有下降；结论：适当浓度的生脉注射液可以诱导心肌组织内干细胞分化为心肌细胞,但由于CSC本身含量极低,因此未能成功将其分选出来。第二部分生脉注射液在体外循环心肌保护中的作用目的：通过临床研究,证实生脉注射液可以减轻体外循环诱发的缺血再灌注损伤,观察体内试验中生脉注射液是否可以诱导心肌组织内干细胞分化为心肌组织；方法：选择行心脏手术的病人,分别选择术前、术中及术后的六个时间点抽取血液,检测血清中SOD、MDA、cTnl和CK-MB水平,术中切除小块心肌组织,用免疫荧光的方法检测其中心肌特异性转录因子（GATA4、Nkx2.5）和特异性蛋白（Cx 43、cTnI）;结果：入院时两组患者血清SOD活力、MDA水平无明显差异,而手术开始时试验组血清SOD活力显着高于对照组,术后一天时试验组血清MDA水平显着低于对照组,而试验组和对照组血清cTnI和CK-MB水平有显着差异；试验组GATA-4和NKx2.5荧光强度显着强于对照组,试验组的cTnT和Cx43仍然趋向较强的荧光信号,但无显着统计学差异；结论：生脉注射液可以增强血清中SOD活力及减少脂质过氧化反应,抑制体外循环过程中的缺血再灌注损伤,而心肌组织内干细胞分化为心肌细胞可能也参与了体外循环心肌保护。第三部分我国大陆地区主动脉夹层发病特征——文献综合分析及与主动脉夹层国际注册研究资料进行对比目的：急性主动脉夹层（AAD）是一种致死率和致残率高的临床急症。为了加深对该病的认识,提高诊治水平,国际主动脉夹层注册研究（IRAD）于1996年成立。中国大陆（MC）是世界上人口最多的地区,每年新发AAD病人越来越多,由于IRAD病例均来源于发达的西方国家,医疗体制、经济发展水平和人种都与MC有所不同,因此该病在IRAD和MC两个群体之间的差异可能被忽略。方法：我们通过检索PubMed数据库和中国全文期刊数据库,通过一定的标准,分别选取了来自IRAD和MC的临床报告,以求助或者购买来获得全文。根据数据性质不同,分别采用t检验、卡方检验或Fisher精确概率计算等方法进行统计,所有统计过程应用SPSS 13.0软件进行。结果：来自MC的AAD病人较IRAD组病人显着年轻,且前者中男性病人比例也高于后者（80.7% vs 68.6%,P<0.001）。中国病人更可能出现非典型症状和体征。与IRAD相比,中国医师更愿意选择磁共振来进行AAD的诊断（45.5% vs 11.6%,P<0.001）。总体上来说,两组住院期间死亡率类似,但是由于研究方法的限制,相当一部分来自MC的病例未能参与统计,并且中国病人接受治疗的比例也较低。结论：通过初步观察和分析,我们可以发现IRAD和MC之间在AAD临床特征上存在一定的差异,但是这些结果需要更深入细致地研究加以证实。
邱海山,刘仿,何继宏,严慧芳,钟羡,林保安[5]（2010）在《肌钙蛋白T在诊断急性心肌梗死中的应用价值》文中提出急性心肌梗死（AIM）是临床常见的急性心血管疾病,发病急、死亡率高,资料表明约有四分之一的患者早期没有典型的临床症状,约50%没有特异的心电图改变。因此,早期诊断及时治疗,对降低死亡率有着十分重要的意义[1]。血清酶学标志物的测定是早期诊断急性心肌梗死（AMI）、监测AMI病情和评价其预后的重要指标之一。过去肌酸激酶同工酶（CK一MB）
熊小明,邓世雄[6]（2008）在《心肌肌钙蛋白T在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性》文中指出目的探寻心肌肌钙蛋白T（cTnT）在家兔缺血心肌中的表达规律及其死后稳定性,并对其在法医学实践中诊断早期心肌缺血的应用价值进行评价。方法用冠状动脉结扎法建立家兔急性心肌缺血模型,应用免疫组织化学法、图像分析和统计学处理系统,检测死后cTnT表达情况,并对实验组和对照组cTnT的表达进行比较。结果缺血区心肌组织可见明显不规则灶状、片状cTnT缺失区,间质呈阴性表达。在4℃放置,随放置时间延长,正常和缺血心肌组织cTnT阳性表达均有减弱趋势,至14d时均完全缺失。但仅在4℃放置1～7d内,缺血心肌和正常心肌标本之间cTnT阳性反应具有显着性差异。结论cTnT的免疫组化表达用于认定死后4℃放置的尸体是否有死前心肌缺血时,宜在7d以内进行。
汪静宇,丁美满,李永宏[7]（2007）在《冠心病猝死的法医病理学免疫组织化学研究进展》文中研究说明冠心病猝死（sudden coronary death,SCD）是各种猝死中最常见的原因,免疫组织化学技术（immuno-histochemistry,IHC）是近年来研究冠心病猝死的有效方法。本文根据国内外文献对冠心病猝死的法医病理学免疫组织化学研究进展作如下综述。
金贺,汪冠三,王慧君,李学锋,刘明,康伟[8]（2007）在《心肌肌钙蛋白T在病毒性心肌炎心肌组织中的表达及意义》文中研究表明目的:了解病毒性心肌炎心肌组织中肌钙蛋白T的表达情况,探讨病毒性心肌炎时心肌结构蛋白损伤的机制及意义。方法:运用免疫组化和计算机图像分析技术,观察13例明确性病毒性心肌炎和17例界限性病毒性心肌炎尸检心脏标本中心肌肌钙蛋白T的表达与分布。结果:在正常对照的心肌组织中,蛋白成强阳性表达,分布均匀,未见缺染。在明确性心肌炎及14例界限性心肌炎心肌组织中都存在着不同程度的蛋白表达缺染或脱失。缺染的范围及分布与病毒性心肌炎病变特点基本一致,但其范围往往小于炎症细胞浸润范围。计算机图像分析和数据统计结果显示缺染区域的心肌肌钙蛋白T表达量要明显小于其周边区域和正常心肌细胞（P＜0．01）。结论:病毒性心肌炎患者的心肌损害要早于炎症细胞的浸润,病毒的作用可能是心肌肌钙蛋白T脱失的主要因素。心肌肌钙蛋白T的免疫组化检查可以作为一种有效的手段,来辅助病毒性心肌炎的病理学诊断。
刘重元,张志伟,周新林[9]（2007）在《早期心肌缺血与梗死后肌钙蛋白和肌红蛋白的观察》文中指出目的:观察早期心肌缺血（可疑）与梗死心肌细胞内肌钙蛋白（CTnT）、肌红蛋白（Mb）的变化情况。方法:应用H．E染色和免疫组织化学技术分别对6例正常心肌、11例早期心肌缺血（可疑）及9例梗死的心肌细胞内肌钙蛋白、肌红蛋白进行观察。结果: H．E染色正常组心肌未见异常;早期（可疑）心肌缺血组未见明显心肌梗死病灶;心肌梗死组见心肌梗死病灶。CTnT和Mb的免疫组织化学染色和图像分析显示,CTnT和Mb在正常组心肌的表达量明显高于早期（可疑）心肌缺血组和心肌梗死组（p＜0．05）。结论:CTnT、Mb免疫组织化学染色可用于早期（可疑）心肌缺血和心肌梗死的诊断。
陈文元,张英俭,何明丰,徐文冲,刘绍辉,魏华,陶江,梁章荣,徐劲松,黎练达[10]（2007）在《参麦注射液对家兔自主循环复苏后心肌肌钙蛋白T的影响》文中提出目的观察参麦注射液对家兔心肺复苏后血清心肌肌钙蛋白 T（cTnT）和心肌组织内 cTnT 脱失的影响,探讨其对心肌保护作用的机制。方法采用家兔缺氧型模型,随机分两组,心肺复苏前后分时间点分别注射参麦注射液、生理盐水,抽取动脉血,测血清 cTnT 值;自主循环恢复后4 h 取心肌组织,应用免疫组化 LSAB 法显色观察 cTnT 表达的脱失情况。结果两组自主循环恢复后血清 cTnT 均升高,但对应时间点比较无显着性差异;参麦组自主循环恢复后4 h 心肌组织内 cTnT 表达部分脱失,对照组明显脱失,两组比较存在显着性差异。结论家兔心肺复苏后血清 cTnT 明显升高,参麦注射液对血清 cTnT 升高无明显抑制作用,对心肌组织内 cTnT 的脱失有明显抑制作用,说明参麦注射液对心肌损伤有一定的保护作用。
二、人心肌梗死心肌肌钙蛋白T脱失的免疫组化观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人心肌梗死心肌肌钙蛋白T脱失的免疫组化观察（论文提纲范文）
（1）右上肢缺血预处理对经右侧桡动脉途径冠状动脉介入术后患者桡动脉闭塞的影响及其机制（论文提纲范文）
| 第一部分 右上肢缺血预处理对经右侧桡动脉途径冠状动脉介入术后患者桡动脉闭塞的影响 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分 肢体缺血预处理影响动脉机械损伤后动脉闭塞机制的探究 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料及方法 |
| 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 图表 |
| 参考文献 |
| 综述Ⅰ 预防及治疗经桡动脉途径冠脉介入治疗术后桡动脉闭塞率的方法 |
| 参考文献 |
| 综述Ⅱ 缺血预适应及其在心血管方面的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
（2）Circ-RHOJ.1竞争性抑制miR-124-3p调控NRG-1影响心肌缺血/再灌注损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 环状RNA简述 |
| 1.1.1 充当miRNA的海绵体抑制miRNA的功能 |
| 1.1.2 结合RNA结合蛋白调节蛋白的功能 |
| 1.1.3 编码多肽发挥特定功能 |
| 1.1.4 调控同源宿主基因的转录 |
| 1.1.5 结合DNA调控线性同源转录本的剪接 |
| 1.1.6 影响同源线性RNA转录本的剪接 |
| 1.1.7 作为假基因发挥功能 |
| 1.1.8 循环的circRNAs发挥生物标记物的功能 |
| 1.2 微小RNA的简述 |
| 1.2.1 miRNAs的生物合成 |
| 1.2.2 miRNAs的作用机制 |
| 1.3 心肌缺血再灌注损伤 |
| 1.4 NRG-1与心血管功能 |
| 1.5 本研究的立项依据和研究内容 |
| 第二章 circ-RHOJ.1、miR-124-3p与NRG-1在心肌缺血再灌注损伤中的表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要的实验设备和试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠心脏缺血再灌注损伤模型构建 |
| 2.2.2 大鼠心脏提取与组织处理 |
| 2.2.3 大鼠心脏组织HE与免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)染色 |
| 2.2.4 成年大鼠心肌细胞提取 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 2.2.6 大鼠乳鼠原代心肌细胞提取及培养 |
| 2.2.7 心肌细胞I/R处理 |
| 2.2.8 总RNA的提取 |
| 2.2.9 反转录和荧光实时定量PCR (qPCR) |
| 2.2.10 细胞免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色 |
| 2.2.11 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) |
| 2.2.12 统计方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 分离和鉴定大鼠心肌细胞 |
| 2.3.2 Circ-RHOJ.1、miR-124-3p以及NRG-1在体外心肌I/R损伤后的表达变化 |
| 2.3.3 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型构建及细胞因子的变化 |
| 2.3.4 Circ-RHOJ.1、miR-124-3p以及NRG-1在体内心肌I/R损伤后的表达变化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 鉴定circ-RHOJ.1、miR-124-3p以及NRG-1的相互作用位点 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要实验设备和试剂 |
| 3.1.2 主要试剂的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 生物信息学预测 |
| 3.2.2 双荧光素酶报告基因 |
| 3.2.3 统计方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 NRG-1是miR-124-3p的靶基因 |
| 3.3.2 Circ-RHOJ.1可作为miR-124-3p的海绵体 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 miR-124-3p对心肌细胞在缺血再灌注损伤下功能的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要实验设备和试剂 |
| 4.1.2 主要试剂的配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞转染 |
| 4.2.2 反转录和荧光实时定量PCR (qPCR) |
| 4.2.3 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) |
| 4.2.4 细胞增殖实验（Cell Counting kit-8, CCK8) |
| 4.2.5 细胞凋亡流式分析 |
| 4.2.6 酶联免疫吸附实验（ELISA) |
| 4.2.7 统计方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 抑制miR-124-3p表达显着提高NRG-1的表达水平 |
| 4.3.2 抑制miR-124-3p表达可以抑制心肌细胞在I/R损伤条件下的炎症反应、促进心肌细胞增殖以及抑制凋亡 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 Circ-RHOJ.1对心肌细胞在I/R损伤下功能的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 主要实验设备和试剂 |
| 5.1.2 主要试剂的配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 心肌细胞中过表达circ-RHOJ.1 |
| 5.2.2 反转录和荧光实时定量PCR (qPCR) |
| 5.2.3 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) |
| 5.2.4 细胞增殖实验(Cell Counting kit-8,CCK8) |
| 5.2.5 细胞凋亡流式分析 |
| 5.2.6 酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 5.2.7 统计方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 过表达circ-RHOJ.1可抑制miR-124-3p表达,提高NRG-1的表达水平 |
| 5.3.2 过表达circ-RHOJ.1可以减轻心肌细胞在I/R损伤条件下的炎症反应、促进心肌细胞增殖以及抑制细胞凋亡 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略语和中英文对照表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（3）早期心肌缺血死后诊断的法医学应用研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 三种组织化学特殊染色在早期心肌缺血死后诊断中的应用和比较 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠急性心肌缺血多指标免疫组织化学检测 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 不同保存条件及 10%福尔马林固定时间对急性心肌缺血免疫组化诊断指标的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 免疫组化诊断指标在人体尸检心脏标本的检测 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 早期心肌缺血死后诊断研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）生脉注射液诱导心肌组织内干细胞分化与体外循环心肌保护（论文提纲范文）
| 目录 英文缩略词 摘要 Abstract 绪论 第一部分 |
| 生脉注射液促进人心肌组织内干细胞分化为心肌细胞的体外实验 1.1 |
| 前言 1.2 |
| 主要试剂和仪器设备 1.3 |
| 实验方法 1.4 |
| 结果 1.5 |
| 讨论 1.6 |
| 结论 1.7 |
| 参考文献 第二部分 |
| 生脉注射液在体外循环心肌保护中的作用 2.1 |
| 前言 2.2 |
| 主要试剂和仪器设备 2.3 |
| 研究方法 2.4 |
| 研究结果 2.5 |
| 讨论 2.6 |
| 结论 2.7 |
| 参考文献 第三部分 |
| 我国大陆地区主动脉夹层发病特征——文献综合分析及与主动脉夹层国际注册研究资料进行对比 3.1 |
| 前言 3.2 |
| 资料与方法 3.3 |
| 结果 3.4 |
| 讨论 3.5 |
| 结论 3.6 |
| 参考文献 附录:综述一中药在体外循环心肌保护中的作用 参考文献 附录:综述二中药在诱导干细胞分化为心肌细胞中的作用 参考文献 攻读博士学位期间取得的学术成果 致谢 个人简介 |
（6）心肌肌钙蛋白T在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物处理 |
| 1.2.2 免疫组化染色 |
| 1.2.3 图像分析 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 HE染色 |
| 2.2 免疫组化染色 |
| 2.3 图像分析 |
| 3 讨论 |
（7）冠心病猝死的法医病理学免疫组织化学研究进展（论文提纲范文）
| 1 检测心肌蛋白 |
| 1.1 肌钙蛋白 (Tn) |
| 1.2 肌动蛋白 (Actin) |
| 1.3 肌红蛋白 (Mb) |
| 1.4 心脏型脂肪酸结合蛋白 (H-FABP) |
| 1.5 mcl-1蛋白 |
| 1.6 缝隙连接 (GJ) |
| 2 检测其他指标 |
| 2.1 纤维连接蛋白 (Fn) |
| 2.2 内皮素 (ET) |
| 2.3 血管内皮生长因子 (VEGF) |
| 3 小 结 |
四、人心肌梗死心肌肌钙蛋白T脱失的免疫组化观察（论文参考文献）
- [1]右上肢缺血预处理对经右侧桡动脉途径冠状动脉介入术后患者桡动脉闭塞的影响及其机制[D]. 刘淼. 山东大学, 2020(04)
- [2]Circ-RHOJ.1竞争性抑制miR-124-3p调控NRG-1影响心肌缺血/再灌注损伤的机制研究[D]. 刘炎. 南方医科大学, 2020(01)
- [3]早期心肌缺血死后诊断的法医学应用研究[D]. 毕海涛. 河北医科大学, 2013(10)
- [4]生脉注射液诱导心肌组织内干细胞分化与体外循环心肌保护[D]. 王东进. 南京中医药大学, 2011(02)
- [5]肌钙蛋白T在诊断急性心肌梗死中的应用价值[J]. 邱海山,刘仿,何继宏,严慧芳,钟羡,林保安. 医学信息(中旬刊), 2010(08)
- [6]心肌肌钙蛋白T在家兔缺血心肌中的表达及其死后稳定性[J]. 熊小明,邓世雄. 法医学杂志, 2008(02)
- [7]冠心病猝死的法医病理学免疫组织化学研究进展[J]. 汪静宇,丁美满,李永宏. 刑事技术, 2007(06)
- [8]心肌肌钙蛋白T在病毒性心肌炎心肌组织中的表达及意义[J]. 金贺,汪冠三,王慧君,李学锋,刘明,康伟. 现代生物医学进展, 2007(06)
- [9]早期心肌缺血与梗死后肌钙蛋白和肌红蛋白的观察[J]. 刘重元,张志伟,周新林. 现代生物医学进展, 2007(06)
- [10]参麦注射液对家兔自主循环复苏后心肌肌钙蛋白T的影响[J]. 陈文元,张英俭,何明丰,徐文冲,刘绍辉,魏华,陶江,梁章荣,徐劲松,黎练达. 临床急诊杂志, 2007(02)