一、甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展(论文文献综述)
兰旭[1](2021)在《2017-2019年太原市某哨点医院流感监测结果和临床特征分析》文中提出目的:对2017年1月-2019年12月山西医科大学第一医院发热门诊的流感病毒监测结果进行回顾性分析,比较流感病毒各型别间的流行趋势及其住院患者的临床特点,以期为流感的防治提供参考依据。方法:收集2017年1月-2019年12月山西医科大学第一医院发热门诊的流感病毒监测结果,并将阳性者按病原学特征分为四组(甲型H1N1组、季节性H3组、乙型Victoria系组和乙型Yamagata系组),对各组患者的分布情况和各组住院患者的一般情况、临床特征及治疗转归等资料进行比较分析。结果:第一部分2017-2019年山西医科大学第一医院发热门诊的流感监测结果分析1.2017年1月-2019年12月就诊于山西医科大学第一医院的流感样病例共采样2200例;流感病毒PCR检测阳性者301例,阳性率为13.68%。其中,甲型H1N1 129例(42.86%),季节性H3 120例(39.87%),乙型Victoria系17例(5.65%),乙型Yamagata系35例(11.63%)。2017年共检出阳性者140例,其中甲型H1N1 41例(29.29%)、季节性H3 84例(60%)、乙型Victoria系0例及乙型Yamagata系15例(10.71%);2018年共检出阳性者84例,其中甲型H1N1 56例(66.67%)、季节性H3 5例(5.95%)、乙型Victoria系4例(4.76%)及乙型Yamagata系19例(22.62%);2019年共检出阳性者77例,其中甲型H1N1 32例(41.56%)、季节性H3 31例(40.26%)、乙型Victoria系13例(16.88%)及乙型Yamagata系1例(1.30%)。2.301例阳性患者中,各组在门诊率、住院率,以及重症+危重症率方面差异有统计学意义(P<0.05)。第二部分36例流感住院患者的临床特征分析实际收集到36例流感住院患者,其中甲型H1N1组25例(69.44%)、季节性H3组4例(11.11%)、乙型Victoria系组1例(2.78%)和乙型Yamagata系组6例(16.67%)。1.一般资料方面。甲型H1N1组中的阳性率以“重+危重症(100%)、住院总费用≥1万(72%)等”较高;季节性H3组中以“有合并症者(75%)”较高;乙型Victoria系组中以“有合并症者和群体性职业者(均为100%)”较高;乙型Yamagata系组中则以“重+危重症(83.33%),住院天数≥14d和住院总费用≥1万者(均为66.67%)等”较高。四组住院患者中甲型H1N1组和乙型Yamagata系组的病死率分别为28%(7/25)和16.67%(1/6),其余两组均为0。2.临床特征方面。四组均以“发热”(阳性率均为100%)常见。甲型H1N1组中的阳性率以“症状[咳嗽(92%)、咳痰(84%)等],体征[肺部啰音阳性(92%)、发热天数>7d(64%)等],辅助检查[胸部CT病变累及双肺(88%)、Lac>2mmol/L(68%)、其他病原检出阳性者(64%)等]和并发症[(肺炎(96%)、呼吸衰竭(72%)肝脏损伤(64%)和ARDS(60%)]”较高。季节性H3组中以“症状[寒战(50%)]和辅助检查[PLT<100×109/L(50%)]”较高。乙型Victoria系组中以“症状[咳嗽]和辅助检查[LYMPH%<10%](均为100%)”较高。乙型Yamagata系组中则以“症状[咳嗽(100%)、咳痰(83.33%)和寒战(66.67%)等],体征[肺部啰音阳性(83.33%)和发热天数>7d(66.67%)等],辅助检查[LYMPH%<10%(83.33%)、PCT>2ng/ml(83.33%)、其他病原检出阳性者(83.33%)和胸部CT累及双肺(66.67%)等]以及并发症[(肺炎(83.33%)、呼吸衰竭(83.33%)、ARDS(66.67%)和心脏损伤(50%)等]”较高。3.治疗转归方面。四组均以“预后良好(72%,100%,100%,83.33%)”为主。另外,甲型H1N1组中的阳性率以“抗流感病毒治疗(60%)和使用呼吸机(52%)”较高,乙型Yamagata系组中以“抗流感病毒治疗(66.67%)、使用呼吸机(50%)、抗细菌药物种数>5种(50%)和抗真菌治疗(50%)”较高。结论:第一部分1.2017-2019年检出的人类流感病毒为甲型H1N1、季节性H3及乙型Victoria、Yamagata系。2.各年的优势毒株存在差异,流感病毒的实时监测意义重大。3.除外乙型Victoria系组的影响,季节性H3组以门诊诊治为主,而甲型H1N1组和乙型Yamagata系组则侧重于住院治疗且重症+危重症率较高。第二部分1.四组流感住院患者在一般资料、临床特征、治疗转归上既有共性也有特性,有助于各种型别的鉴别。2.四组流感住院患者往往预后良好;甲型H1N1组和乙型Yamagata系组的流感住院患者大多病情较重,少数预后不良甚至死亡,而季节性H3组和乙型Victoria系组的住院患者大多病情较轻。
任晓婷[2](2021)在《双花柴芩散治疗小儿流行性感冒(风热犯卫证)的临床疗效观察》文中认为目的:本研究依据2018年卫健委颁布的《流行性感冒诊疗方案(修订版)》制定,采用随机对照原则对导师孙丽平教授经验方双花柴芩散进行临床疗效评价,并观察治疗后的不良反应及安全性,阐明其临床优势,为科学治疗小儿流行性感冒提供可靠的循证医学证据。方法:本研究选取2019年11月至2020年12月就诊于长春中医药大学附属医院儿童诊疗中心门诊流感样症状患儿,进行流感病毒快速抗原检测(咽拭子),检测结果呈阳性,且符合纳入、排除标准为临床研究对象,随机分为试验组、对照组,试验组给予双花柴芩散(中药免煎剂型)联合磷酸奥司他韦颗粒治疗,对照组给予小儿豉翘清热颗粒联合磷酸奥司他韦颗粒治疗,退热及其他基础治疗均一致,治疗周期为5天。在治疗期间,观察并详细记录基线特征、中医证候积分、西医症状积分、实验室检验等情况,将试验数据运用SPSS25.0软件进行统计学分析。结果:病例纳入情况:本临床研究共收集临床病例100例,剔除2例,剔除率为2%;脱落3例,脱落率为3%,最终纳入病例95例,试验组48例,对照组47例。基线特征分析:受试患儿95例,男55例,女40例。试验组男29例,女19例;对照组男26例,女21例。发病前1周内明确流感患者接触史53例,密切接触33例,接种流感疫苗8例。两组受试患者治疗前平均体温无显着差异。治疗结果分析:两组在缩短发热时间,缓解全身中毒症状中恶寒、头痛、肌肉酸痛,呼吸道症状中喷嚏、咽痛、咳嗽、咯痰的临床症状方面存在显着差异(P〈0.05),而在汗出、口渴、鼻塞、流涕的缓解时间不存在显着差异。试验组在中医证候积分、西医症状积分中的临床症状、功能下降幅度均明显高于对照组,存在显着差异(P〈0.05),对父母的影响无显着差异。试验组临床疗效明显优于对照组,存在显着差异(P〈0.05),在临床治愈(愈显率、有效率)上不存在显着差异。安全性评估分析:试验组出现实验室检验异常指标2例,不良反应2例;对照组出现实验室检验异常指标6例,不良反应3例,两组在用药安全性方面不存在显着差异(P〉0.05)。结论:双花柴芩散联合奥司他韦治疗小儿流行性感冒临床疗效显着优于对照组,具体表现在完全退热时间、主要症状缓解时间、中医证候积分、西医症状积分等方面,尤其在缓解头痛、全身酸痛、咽痛、咳嗽等临床症状明显优于对照组,具有良好的安全性。
张佳琦[3](2021)在《基于B细胞分离技术筛选马流感中和抗体》文中认为马流行性感冒(Equine Influenza,EI)简称马流感,是由正粘病毒科(Orthomyxoviddae)流感病毒属(Influenza virus)马A型流感病毒(Equine Influenza Virus,EIV)引起的一种急性暴发式流行的病毒性传染病。该病传播速度快,传播范围广,对全球马业造成了不可估量的经济损失,是威胁马产业健康发展的重要传染性疾病之一。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所自主研制的马流感灭活疫苗(H3N8亚型,XJ株)可使免疫马匹对马流感现有流行毒株产生完全保护,且保护效力持久。但由于流感病毒具有抗原漂移的特性使得现有疫苗较难产生有效的交叉保护。因此,抗体药物作为重要的免疫学和治疗手段,成为流感防控策略的重要部分。近年来,通过有效的抗体筛选手段,筛选到能够有效中和流感病毒的中和抗体成为众多研究人员的目标。马流感在此领域的研究尚属空白。因此本研究拟通过建立高效马源抗体筛选平台,从马流感灭活疫苗免疫马的外周血淋巴细胞(Peripheral blood lymphocytes,PBMCs)中筛选具有中和活性的单克隆抗体。一方面在疾病大流行期间可以快速提供被动性免疫治疗;同时通过对中和抗体的中和表位的认知,也可促进对马流感新型疫苗的研发。近年来基于单个B细胞扩增技术筛选单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)逐渐兴起,其抗体重链和轻链是天然组合、副作用低、生产快速且特异性良好。因此,本研究选择该方法作为搭建马流感中和抗体的筛选平台主要技术方案。首先,为了增加获得重组单克隆抗体的阳性率,需要获得IgG+表型的B细胞,而目前市场上尚无商品化马源IgG单克隆抗体。因此,本研究团队与暨南大学合作,利用暨南大学已经建立的鼠源B细胞单克隆抗体筛选平台进行了马源IgG单克隆抗体的制备。首先,构建马源IgG真核表达质粒并进行蛋白纯化,采用DNA初免,Protein加强的策略免疫小鼠。分离免疫小鼠脾细胞,通过流式细胞术分选获得单个的特异性识别马源IgG+记忆性B淋巴细胞。随后对单个记忆性B淋巴细胞进行裂解、提取单个细胞的总RNA、反转录、单细胞PCR等方法,分别扩增出马源IgG单克隆抗体的重链、轻链可变区基因片段。并分别连接到抗体恒定区表达载体上构建马源IgG重组单克隆抗体的表达载体(pc DNA3.1-eq IgG-(V+C)H和pc DNA3.1-eq IgG-(V+C)L)。经共转染HEK293F细胞后,收集细胞培养上清,通过蛋白纯化凝胶(protein A)纯化马源IgG重组单克隆抗体。随后利用ELISA试验,在体外验证所获得的马源IgG重组单克隆抗体与马源IgG蛋白的结合能力。结果显示,我们分离获得870个CD4-/CD8-/B220+/Ig D-/IgG+表型的记忆B淋巴细胞,通过融合PCR以及序列比对最终获得了24对马源IgG重组单克隆抗体的重链、轻链可变区基因线性表达质粒。其中有21株马源IgG重组单克隆抗体可以与马源IgG蛋白结合。选取结合最强的G23株马源IgG重组单克隆抗体通过亲和素标记,用于后续马源B淋巴细胞抗体基因筛选平台中。随后,我们使用了马流感灭活疫苗(XJ株)进行了马匹免疫(6匹),并于相应的时间点进行PBMCs和血清的同步分离。血清经HA效价测定后,选择免疫后期且HA效价>210(HA效价>26即可以产生免疫保护)的马匹血清样本对应的PBMCs进行记忆性B淋巴细胞的流式分选。获得Aq VD-/CD4-/CD8-/IgG+/CD21+/HA+表型的记忆性B淋巴细胞。分别使用抗体重链和轻链的特异性引物进行PCR扩增及相应的重组抗体表达载体的构建(此部分由合作方完成)。经HEK293F转染、Protein A纯化、ELISA结合试验验证后,本次研究由108个马PBMCs中获得了10株马流感HA重组单克隆抗体(H16、H24、H38、H58、H74、H81、H87、H100、H125、H129)。经表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)和微量中和实验的鉴定,明确其中H81号马流感HA重组单克隆抗体具有良好的中和活性。综上所述,本研究成功制备了马源IgG重组单克隆抗体,协助合作方共同建立了马源单个B细胞抗体制备平台。利用此平台获得了一株具有良好中和活性的HA重组单克隆抗体,可以用于后续研究。同时该研究也为其它马源性疾病中和抗体的筛选提供了高效的研究平台。
王上[4](2021)在《基于自噬途径研究小柴胡汤对甲型流行性感冒的干预作用》文中研究表明背景甲型流感病毒是一种具有高度传染性和致病性的病毒,且具有高突变性,流感易苗易于失效且抗病毒药物治疗具有一定局限性。因此,以宿主因素为靶点的治疗手段成为抗流感病毒新兴疗法和未来趋势,而这一转变正是中医邪正关系的体现,也正是中医治疗的优势所在。细胞自噬是流感病毒与宿主之间相互作用的重要机制之一。甲型流感病毒可以诱导自噬体的大量堆积并阻止自噬体与溶酶体的融合,从而导致自噬流的不顺畅。而自噬流的不顺畅恰好与伤寒少阳枢机不利非常相似。因此,基于这个层面,针对少阳枢机不利,选用少阳方(如小柴胡汤),将可能促进有效自噬流的完成,从而截断病情的深入,防止肺炎的发生。小柴胡汤是《伤寒论》少阳病的主方,也是扶正祛邪的代表方,已有研究报道,小柴胡汤具有明显的抗流感病毒作用,同时能提高机体免疫力和降低炎性反应。而对于小柴胡汤调节自噬的作用却鲜为报道。因此,本研究从科学计量学、理论研究、网络药理学和实验研究四个方面对小柴胡汤治疗甲型流行性感冒的疗效、作用机制及配伍意义进行初步探讨,以期为防治病毒感染性疾病用药靶点提供新的思路。目的1.运用科学计量学方法(citespace)对流感研究现状及前沿热点进行分析并挖掘流感与自噬共同作用通路,预测未来研究趋势。2.通过溯源少阳本义,结合《伤寒论》原文,从少阳病病机演变、小柴胡汤方证、小柴胡汤中药药理学谱等方面阐述小柴胡汤治疗甲型流行性感冒的理论及临床依据。3.对小柴胡汤治疗流行性感冒的网络药理学研究,从“中药-成分-靶点-通路”的层面预测其主要作用机制,及体现药物配伍意义的主要通路。4.结合组方原则及网药结果,研究小柴胡汤及拆方对H1N1流感病毒的体外抑制作用,其机制是否与自噬相关,并阐释其配伍意义。方法1.以“流行性感冒”为研究主题,运用citespace软件,检索Web of Science(Wo S)数据库的2005-2020年文献,将结果从关键词共现、关键词聚类、关键词突现、双图叠加等四个方面进行可视化分析。2.筛选小柴胡汤有效成分并对应靶点基因,并检索流感疾病靶点。应用Cytoscape3.2.6软件构建小柴胡汤-流感-靶点-通路网络,筛选核心靶点基因,进行GO功能和KEGG富集分析,预测主要作用机制及复方配伍意义主要通路。3.制备小柴胡汤及拆方的水提醇沉提取液、颗粒剂及含药血清三种制剂,分别对人A549、狗肾细胞(MDCK)两种细胞系进行细胞毒性测定和神经氨酸酶活性测定,筛选最优制备方案和最适细胞系。4.基于最适细胞系和小柴胡汤及拆方最适制备方案,运用免疫印迹法检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、m TOR及磷酸化、beclin蛋白表达表达,探讨小柴胡汤及拆方对流感病毒诱导自噬的调控及作用机制,并阐释并配伍意义。结果1.共纳入流感机制文献7223篇,关键词聚类主要分为流感致病性和发病机制研究;宿主免疫应答及炎性反应研究;抗流感药物及疫苗的研究。流行性感冒机制研究与细胞自噬研究领域共同的关键词为自噬、复制、感染、凋亡、NF-κB、天然免疫反应等。2.小柴胡汤成分靶点与流感疾病靶点共有51个靶点,其主要成分为槲皮素、山奈酚、豆甾醇、异鼠李素、β-谷甾醇、二甲氧基黄酮、人参皂苷Rh2、蓝堇碱、叶含长管贝壳杉素A九种,其核心基因为VEGFA、AKT1、IL6、TNF、MMP9、JUN、IL10、IL18等十个,其富集分析多与炎症反应、各种代谢相关。3.在MDCK细胞中,小柴胡汤及核心拆方水提液的抗病毒选择指数均为1左右;小鼠血清在体外(细胞)抗病毒实验中表现出极强的抗流感病毒活性,选择指数为128.2以上;小柴胡汤、柴-芩-参颗粒剂的抗病毒选择指数均为1左右,柴-芩颗粒剂的抗病毒选择指数为2,具有一定的抗病毒效力。此外,小柴胡汤及拆方颗粒剂对人A549细胞的存活率整体不高,尤其是柴-芩颗粒剂低浓度对A549细胞即显示一定毒性,存活率<85%。在神经氨酸酶抑制活性检测中显示,小柴胡汤及拆方颗粒剂对H1N1流感病毒没有抑制作用,无SI。4.病毒感染组与空白对照组相比,LC3-Ⅱ蛋白表达水平显着升高(P<0.01)。小柴胡汤及拆方颗粒剂与病毒感染对照组相比,有下调LC3-Ⅱ蛋白表达的作用(P<0.01),尤以小柴胡汤组最为明显。与病毒感染组相比,小柴胡汤及拆方颗粒剂均有上调p62蛋白表达的作用,其中,柴-芩组最为明显(P<0.01),柴-芩-参组次之(P<0.05),小柴胡汤最次。小柴胡汤及拆方三组与病毒感染组相比,有上调p-m TOR蛋白水平表达的趋势(P>0.05),其中柴-芩组上调作用最为明显。小柴胡汤组与病毒感染组相比,下调beclin-1蛋白表达最为明显(P<0.05),柴-芩-参组下调作用最次,无统计学差异(P>0.05)。结论1.科学计量学及理论研究表明,流感的发生发展以及严重程度与病毒和宿主的相互关系密不可分。以宿主为靶点的治疗手段是该领域研究的重要转变,而这一转变正体现了中医扶正祛邪的治疗特色。细胞自噬是流感病毒与宿主之间相互作用的重要机制之一。在中医看来,甲流病毒导致自噬流的不顺畅与伤寒少阳枢机不利非常相似,这也正与小柴胡汤方证相合。2.网络药理学结果可知,小柴胡汤可调节神经-免疫-炎症反应,治疗甲型流行性感冒,其主要机制与柴胡、黄芩、人参三味药相关。3.实验结果可知,从抑制甲型H1N1神经氨酸酶活性而言,仅柴胡-黄芩表现出一定抑制作用,体现了其祛邪之功。小柴胡汤无抑制NA活性作用,但在自噬调节上作用明显,且在下调LC3-Ⅱ/LC3-I表达及抑制Beclin-1蛋白水平方面更为突出,其机制可能与Beclin-1相关,而同样具有扶正祛邪之意的柴胡-黄芩-人参组却有差异,提示夏、姜、枣、草四味药可能在配伍中发挥着促进自噬降解的作用。此外,鉴于小柴胡汤本身不能抑制NA活性,说明小柴胡汤的作用靶点可能不直接作用于病毒,可能主要在宿主因素,与调节自噬、促进自噬代谢途径有关。因此,小柴胡汤对自噬的调节作用,从某种意义上讲,拓展了小柴胡汤临床运用的新思路,也在一定程度上揭示了小柴胡汤扶正祛邪的作用机制与药物君臣佐使配伍的意义,为今后进一步深入研究奠定基础。
游泓[5](2021)在《复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒的相关meta分析及临床疗效回顾性研究》文中研究指明目的:1.本研究旨在系统评价清热解表法治疗流行性感冒的疗效和安全性,以期为复方银翘感冒合剂在流行性感冒的临床治疗中的应用给予循证学支持。2.通过临床病例回顾性研究,进一步明确复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒的临床疗效,探讨风热犯卫型流行性感冒的辨证论治,加强复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒临床应用的认识并拓宽临床治疗路径。方法:1.通过检索中文数据库Wan Fang Data、CNKI、VIP和CBM及英文数据库Pub Med,搜集有关清热解表法治疗流行性感冒的随机对照试验。分别由两名研究者对检索出的文献进行筛选并搜集相关病人资料及数据,对最终纳入的文献采用Rev Man5.4软件进行Meta分析。2.对湖北省中医院在2018年10月1日至2020年10月1日到院治疗流行性感冒的病例采用回顾性调查研究方法,筛选出符合纳入标准及排除标准的病例总共58例,根据病例采用治疗方法的不同将病例分为两组,其中观察组30例,对照组28例,对照组采用磷酸奥司他韦颗粒治疗,观察组在对照组的基础上联合复方银翘感冒合剂治疗。采用SPSS20.0软件对两组病例在中医证候积分、退热时间、hs-CRP、PCT等炎症因子指标及不良反应等方面进行评估及统计分析,以总结评估复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒的临床疗效。结果:Meta分析中共纳入19个RCT,包括2332例患者,结果显示:清热解表类中药组退热有效率优于抗病毒西药组[RR=1.19,95%CI(1.15,1.24),Z=8.96,P<0.001],差异有统计学意义。清热解表类中药在咳嗽缓解时间[MD=-1.01,95%CI(-1.23,-0.80),Z=9.34,P<0.001],头痛缓解时间[MD=-0.70,95%CI(-0.75,-0.64),Z=24.83,P<0.001],肌肉酸痛缓解时间[MD=-0.80,95%CI(-0.86,-0.75),Z=28.68,P<0.001],核酸转阴有效率[OR=3.66,95%CI(1.67,8.03),Z=3.24,P<0.01]等方面优于抗病毒西药组,且差异有统计学意义。2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义。临床研究显示:观察组总有效率为96.67%,对照组总有效率为92.86%,观察组总有效率高于对照组。观察组经治疗后的退热时间、咳嗽评分、鼻塞流涕评分、中医证候量化总评分之和及hs-CRP、PCT指标与对照组相比明显降低(P<0.05),且差异有统计学意义。观察组经治疗后的头痛评分、咽痛评分与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论:复方银翘感冒合剂汤联用磷酸奥司他韦颗粒治疗流行性感冒(风热犯卫证)的疗效优于单用磷酸奥司他韦颗粒治疗,与单用磷酸奥司他韦相比,复方银翘感冒合剂能够缩短退热时间,降低hs-CRP、PCT的水平,同时能够改善发热、咳嗽及鼻塞流涕等症状。
李云[6](2021)在《中医药治疗流行性感冒的用药规律研究》文中提出目的:拟收集已上市流感中成药处方及古籍中流感相关处方,基于数据挖掘的分析方法,探讨古今中医药治疗流感的用药特点及组方规律。结合流感证候分布特点及专家临证经验,制定“表寒里热证”流感新方,并从网络药理学角度分析新方核心药物的可能作用机制,以期为流感的中医药临床诊疗及新药研发提供参考。方法:(1)检索各中成药目录及指南收集治疗流感的中成药处方信息,检索《中华医典》(第五版)筛选流感相关古方信息,按标准进行数据清洗后,使用中医传承辅助平台系统、IBM SPSS Statistics等软件进行药物频次、功效、性味、归经统计,通过k-means聚类、关联规则分析及系统聚类得到处方的核心药物组合及组方规律。(2)选取流感新方中的核心药对进行网络药理学研究,通过中药系统药理学分析平台收集药物的有效成分、靶点,在Genecards、DisGeNET、OMIN数据库中检索流感相关靶点,将已收集的活性成分靶点和疾病靶点利用R软件制作Venn图取得交集靶点。建立药物、活性成分、靶点、疾病的作用关系后,通过Cytoscape软件进行网络可视化、运用String数据库获得蛋白质互作关系、通过GO及KEGG富集分析获得核心药物治疗流感的可能作用靶点及通路。结果:处方分析部分:中成药处方共纳入69个,共涉及137种中药,其中金银花、连翘、甘草、黄芩、板蓝根等的使用频率最高,以寒性药物为多,占50.5%,味苦、辛、甘药物使用较多,归经以肺经、胃经、肝经为主,功效分布以清热类、解表类、补虚类为主。通过k-means聚类、关联规则分析得到核心药物组合4个。古籍中流感相关处方共纳入211个,共涉及176种中药,其中甘草、石膏、葛根、黄芩、麻黄等的使用频率最高。药性以寒性、温性、平性为主,分别占35.6%、35.0%、18.9%,味以辛、苦、甘味药物使用较多,归经方面以肺经、脾经、胃经、心经和肝经为主,功效分布以清热类、解表类、补虚类主。通过k-means聚类及关联规则分析,获得古方的核心药物组合6个。对古方中的高频药物进行系统聚类,得到13组聚类方。(2)网络药理学部分:利用TCMSP数据库,根据筛选条件获得四味中药共含有活性化学成分77种、靶点454个,去重后共有70种活性化学成分、219个靶点,在3个疾病数据库中获得疾病靶点1201个。将药物靶点与疾病靶点取交集,得到核心药物治疗流感的潜在作用靶点共54个。通过复杂网络构建,结果显示化合物中槲皮素、木犀草素、山奈酚等连接靶点较多,PPI网络图中显示AKT1、IL-6、VEGFA、PTGS2、IL1B等为核心药物治疗流感的关键靶点。GO功能富集及KEGG通路富集分析中,靶点富集程度较高的功能是细胞因子受体结果、细胞因子活性等,靶点富集程度较高的通路为白介素-17、肿瘤坏死因子信号通路等。讨论:中成药处方的用药以寒性和凉性药物的使用频率高,占所有药物的64.7%,治法以辛凉透表、清热解毒为重,兼见祛风散寒、宣肺利咽。古方以寒温并用为整体用药特点,所体现的治法更为多样,如解表、清热、散寒、祛风通痹、养阴清肺、益气健脾除湿、利水泄热、调和气血、宽胸理气止痛等。古今处方的用药存在差异,考虑可能与现代人的生活习惯及社会环境发生变化有关。流感的中医证候分布,不仅与六淫邪气有关,亦由体质、年龄、气候、地理等因素共同决定。现代人饮食偏嗜辛辣油腻、情志易郁化火,且北方气候干燥寒冷,“表寒里热证”在临床中较为多见。结合上述研究结果及专家临证经验,针对表寒里热证流感“寒邪在表”与“热邪在里”的核心病机,拟“葛芩表里双解方”。选取其核心药物进行网络药理学研究发现,药物中含有槲皮素、木犀草素、汉黄芩素、黄芩素等活性化学成分,可通过调控IL6、PTGS2、IL1 β、JUN、CCL2、CXCL8、CASP3、IL10、ICAM1等靶点,调节IL-17、TNF、Toll样受体及甲型流感等信号通路,在流感患者免疫、氧化应激、炎症反应等过程中发挥重要作用。
夏炫梓[7](2020)在《20172018年广州市乙型流感病毒HA、NA基因特征及中西药抗病毒药效初筛研究》文中提出【背景】根据WHO流感监测数据显示,2017年第45周至2018年第13周,在全球范围内,乙型流感病毒成为季节性流感的优势株,其中Yamagata谱系占据主导优势,对人群的健康带来一定程度的影响。针对流感的防治,西医主要通过注射流感疫苗进行免疫预防和使用化学药物阻断病毒的繁殖进程,中医药通过抑制病毒复制、调节机体炎症反应等多方面发挥作用。化学药物主要以神经氨酸酶抑制剂和M2离子通道阻滞剂为主,传统中药主要以单味中药和中药复方为主。反向遗传学对流感病毒的基因研究具有重要的意义。甲型流感病毒的反向遗传学技术平台已被广泛构建和应用,而乙型流感病毒的反向遗传学技术平台的成功构建却鲜有报道。【目的】本研究深入了解2017~2018年广州市流行的乙型流感病毒HA和NA的基因特征和流行原因,探索病毒序列新变异是否会引起病毒功能性改变,为流感监测防控和药物治疗流感提供科学依据。另外,构建乙型流感病毒反向遗传学平台,为乙型流感病毒基因研究和中药抗乙型流感病毒机制研究提供基础。【方法】一、采集2017年12月~2018年4月在广州市哨点医院的流感患者的咽拭子样本,应用免疫荧光法检测出乙型流感病毒样本后进行病毒分离培养和病毒RNA提取,通过一步法RT-PCR扩增病毒目的基因血凝素和神经氨酸酶,再进行基因序列测定和分析。二、根据序列比对分析的结果,选用神经氨酸酶基因上具有未报导过的氨基酸突变位点的9株病毒进行奥司他韦和帕拉米韦体外药物敏感性实验筛选,观察是否存在耐药性病毒株,以及使用连花清瘟胶囊进行体外抗病毒活性实验,观察奥司他韦、帕拉米韦与连花清瘟胶囊抑制病毒活性之间的差异。使用100TCID50的病毒量感染MDCK细胞后,分别加入连续半数稀释浓度的奥司他韦溶液、帕拉米韦溶液和连花清瘟胶囊溶解液,观察细胞病变和计算IC50值。三、根据序列比对分析的结果,选用血凝素基因上具有未报导过的氨基酸突变位点的9株病毒进行生长曲线实验观察病毒株之间增殖能力的差异。使用0.01MOI的病毒量感染MDCK细胞,分别在24h、48h和72h回收病毒上清液,再通过空斑实验来观察病毒株的增殖能力。四、使用pHW2000载体为骨架,构建包含各个病毒基因片段的8个重组质粒,将质粒混合后转染293T和MDCK混合细胞,培养后通过感染MDCK细胞进行病毒传代,进而完成乙型流感病毒的拯救。【结果】一、总共分离扩增2017~2018年乙型流感病例鼻咽拭子样本40份,成功分离出38株,初步鉴定出Yamagata系28株,Victoria系10株。对38株乙型流感病毒的HA、NA基因进行测序并构建进化树进行分析,(1)HA进化分析显示:28株Yamagata系乙型流感病毒的HA基因均属于Yamagata Clade 3分支,并且与疫苗株B/Phuket/3073/2013属于同一亚支,还有一个亚支为B/Wisconsin/1/2010类似株;10株Victoria系乙型流感病毒均属于Victoria Clade 1A分支,其中以B/Hong Kong/286/2017和B/Norway/2409/2017为代表的进化亚支Clade lA(▲1、▲2)中未出现广州市流行株。(2)NA进化分析显示:28株Yamagata系乙型流感病毒中有27株的NA基因属于Yamagata Clade 3分支,并且与疫苗株B/Phuket/3073/2013属于同一亚支;10株Victoria系乙型流感病毒均属于Victoria Clade 1A分支,以B/Norway/2409/2017为代表的进化亚支Clade lA(▲2)中未出现广州市流行株,以B/Hong Kong/286/2017为代表的进化亚支Clade lA(▲1)中出现广州市流行株。另外,发现了病毒株B/Guangdong/GZ20/2018毒株为BY-HA/BV-NA系间重配病毒。对38株乙型流感病毒进行HA、NA氨基酸序列分析,(1)HA氨基酸序列分析:28株Yamagata系病毒株(包括B/Guangdong/GZ20/2018)共有11个氨基酸位点发生突变,28株均携带L187Q和M266V突变;另外,发现突变位点S93P、R151K、N179K、P342S、V421A、N436S、T547I。B/Guangdong/GZ14/2018毒株缺失第540位氨基酸。B/Guangdong/GZ40/2018毒株发现T136I位点突变,位于120环抗原表位上。10株Victoria系病毒株共有7个氨基酸位点发生突变,10株均携带I132V、N144D和A214T突变,其中I132V位于抗原表位120环上,N144D位于抗原表位150环上;另外,发现突变位点A169T、K227R、N248D和P343S。(2)NA氨基酸序列分析:27株Yamagata系病毒株(不包括B/Guangdong/GZ20/2018)共有22个氨基酸位点发生突变,26株(96.3%)携带I49M突变,19株(70.4%)携带R65H突变,24株(88.9%)携带I171M突变,25株(92.6%)携带D342K突变,另外两株病毒B/Guangdong/GZ16/2018和B/Guangdong/GZ34/2018在342位点则携带D342N突变,27株(100%)均携带K373Q突变,17株(63%)携带S402P突变;另外,发现突变位点I6T、F12L、V45I、P48S、A67V、A67T、G70E、P76L、N144S、R186I、F266L、E308G、R315K、T372N、T389I、K419E、T437I。10株Victoria系病毒株和系间重配株B/Guangdong/GZ20/2018共有12个氨基酸位点发生突变,11株均携带I120V、K220N、S295R、N340D、E358K突变,8株(73%)携带D384G突变,3株(27%)携带V401I突变;另外,发现突变位点P48T、T106I、I262M、M369V、V422I。二、所选取的9株病毒株中有5株存在不同程度的耐药性,而且5株病毒均属于Yamagata谱系。连花清瘟胶囊对其中4株耐药性程度较大的病毒株和药物敏感性参考株的体外活性抑制作用相近。三、Yamagata谱系病毒株B/Guangdong/GZ19/2018、B/Guangdong/GZ23/2018、B/Guangdong/GZ24/2018、B/Guangdong/GZ28/2018和B/Guangdong/GZ29/2018具有比B/Guangdong/GZ40/2018更强的增殖能力;Victoria谱系病毒株B/Guangdong/GZ39/2018的增殖能力比B/Guangdong/GZ11/2018更突出;系间重配株B/Guangdong/GZ20/2018的增殖能力弱于其他8株病毒。总体而言,Yamagata谱系病毒株在增殖能力上比Victoria谱系病毒株更强。四、成功构建乙型流感病毒反向遗传学平台。【结论】2017~2018年度WHO推荐的三价流感疫苗株未能对广州市人群形成良好的保护作用。因此,须密切关注乙型流感病毒的变异情况以及和疫苗株的匹配度,以便及时制定合理的疫苗更新和接种方案,对流感进行科学有效的防控。流行株中存在的对神经氨酸酶抑制剂奥司他韦和帕拉米韦产生耐药性的现象,以及耐药株和药敏株之间存在未报导过的氨基酸突变位点,而连花清瘟胶囊发挥传统中药的优势,对耐药性病毒株具有稳定的抗病毒活性作用。另外,Yamagata系流行株具有比Victoria谱系流行株更强的增殖能力,而不同谱系的毒株之间的增殖能力也存在一定的差异,并且,不同谱系的病毒株之间存在未报导过的氨基酸突变位点。其中的机制需进一步验证。
曾志奇[8](2020)在《臭灵丹药效部位抗流感病毒及抗炎作用机制研究》文中指出背景:云南滇药臭灵丹(Laggera pterodonta)是菊科翼齿六棱菊属植物,为临床治疗流感的常用中药。臭灵丹成分复杂,其抗病毒物质基础及药理作用机制也未清晰。目前研究发现乙醇提取物能在体内发挥抗流感病毒作用。醋酸乙酯部位(即本文的药效部位)经过体外初步筛选,能发挥抑制流感病毒的活性作用,抑制病毒效率比乙醇提取物及组分好。为了进一步阐明臭灵丹的抗病毒物质基础,本文在本课题组先前基础上对该药效部位进行体内外药效研究。另外,前期研究发现石油醚萃取分离的臭灵丹酸被发现具有明显的抗病毒抗炎作用并且也在本药效部位中,因此本文使用有效成分臭灵丹酸进行抗病毒靶点抗炎机制研究。目的:(一)对臭灵丹药效部位提取及有效成分臭灵丹酸分离鉴定(二)对药效部位进行体内外药效试验探究其抗病毒及抗炎作用(三)寻找有效成分臭灵丹酸抗病毒靶点及探究其抗炎机制方法:(一)使用乙醇对臭灵丹药材进行提取,使用醋酸乙酯进一步萃取,获得大量药效部位。对石油醚萃取获得的C8组分进行硅胶柱层析分离臭灵丹酸。随后采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间-质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS)对药效部位进行分析并鉴定及对臭灵丹酸进行含量测定。(二)以噻唑蓝染色法(MTT法)检测该药效部位的体外细胞毒性,以病毒空斑减少法检测其对不同亚型流感病毒(A/PR/8/34(H1N1)、A/GZ/GIRD07/09(H1N1)、A/HK/4801(H3N2)、A/Aichi/2/1968(H3N2)、A/HK/Y280/97(H9N2)、B/Lee/1940(FLU B))的抗病毒活性。以子代病毒减少法进一步确认药效部位对H1N1,H3N2的抑制作用及使用实时荧光定量PCR检测该部位对流感病毒诱导的炎症因子信使RNA(mRNA)表达水平。使用小鼠和雪貂流感病毒性肺炎模型研究该部位体内抗病毒药效。(三)使用病毒生长曲线实验及聚合酶荧光素酶实验检测臭灵丹酸对流感病毒的作用靶点,使用实时荧光定量PCR检测臭灵丹酸作用于流感感染细胞的RIG-I、TRIAL、Fasl、IFN-α和IFN-β、PD-L1、PD-L2 mRNA表达水平和使用蛋白免疫印迹技术检测臭灵丹酸作用于流感感染细胞的RIG-I、NF-κB/ERK、STAT1等宿主细胞信号通路。结果:(一)对臭灵丹药效部位提取鉴定及有效成分臭灵丹酸分离使用95%乙醇对臭灵丹药材进行提取并且使用醋酸乙酯萃取出药效部位,初步鉴定有119种化学成分,包括倍半萜类、黄酮类、酚酸、有机酸、内酯类等成分,其中也包括臭灵丹酸,为后续体内外抗流感病毒试验及抗病毒抗炎机制奠定基础。(二)臭灵丹药效部位体内外抗流感病毒药效分析臭灵丹药效部位在体外给药模式下对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)、A/GZ/GIRD07/09(H1N1)、A/Aichi/2/1968(H3N2)均有抑制作用,IC50分别为22.1±2.08μg/ml和11.22±1.31μg/ml,44.3±2.1μg/ml,SI分别为3.26、6.42、1.38;子代病毒产量减少法进一步确认该部位在17.5μg/ml(P<0.05)、35μg/ml(P<0.05)、70μg/ml(P<0.05)浓度下均有效抑制A/PR/8/34(H1N1)、A/GZ/GIRD07/09(H1N1)、A/Aichi/2/1968(H3N2)的增殖。在感染48h后,炎症因子mRNA水平检测发现该部位在60μg/ml浓度下对MCP-1(P<0.05)、IP-10(P<0.05)、IL-8(P<0.05)、IL-1β(P<0.05)过表达均有抑制作用。在体内实验中,臭灵丹药效部位分别对A/Aichi/2/1968(H3N2)、A/PR/8/34(H1N1)感染小鼠引起的病毒性肺炎均具有改善作用。A/Aichi/2/1968(H3N2)感染小鼠后,400mg/kg、600mg/kg的臭灵丹药效部位治疗能使小鼠体重的变化减少,肺指数下降(P<0.05),肺部组织病毒滴度也降低(P<0.05)。600mg/kg臭灵丹药效部位治疗后,发现有效抑制BALF液、血清样本中的IL-6(P<0.05)、MCP-1(P<0.05)、RANTES(P<0.05)蛋白水平的过度表达。A/Aichi/2/1968(H3N2)感染的小鼠肺病理显示支气管上皮脱落,坏死,周围淋巴细胞浸润,邻近肺组织、肺间质增宽,组织细胞、淋巴细胞浸润,血管水肿,血管周围炎细胞浸润。400mg/kg、600mg/kg的臭灵丹药效部位均对小鼠的肺病变有所改善,减少炎症细胞浸润。A/PR/8/34(H1N1)感染小鼠后,400mg/kg、600mg/kg的臭灵丹药效部位治疗能使小鼠体重变化减少,肺指数下降(P<0.05),病毒滴度也有所降低(P<0.05)。600mg/kg臭灵丹药效部位治疗发现有效抑制血清中IL-6(P<0.05)、RANTES(P<0.05)蛋白水平的过表达。另外,该部位对雪貂的病毒性肺炎在体征上有改善作用。250mg/kg臭灵丹药效部位治疗组可有效缓解流感病毒感染雪貂的流感样症状,包括缓解体重下降、体温升高、活跃度降低以及鼻部症状。(三)臭灵丹酸抗病毒抗炎机制研究通过病毒生长曲线发现100μg/ml臭灵丹酸在流感病毒用药后24h(P<0.05)、48h(P<0.05)、72h(P<0.05)均有效抑制A/PR/8/34(H1N1)。但对于H3N2来说,100μg/ml臭灵丹酸除了在流感病毒感染后用药24h(P<0.05)有明显抑制外,48h及72h均不能抑制,通过反向遗传技术包装重组病毒初步判断臭灵丹酸作用H1N1的靶点是PB1、PB2、PA、NP、M、NS蛋白。通过聚合酶荧光素酶实验发现50μg/ml(P<0.05)、100μg/ml(P<0.05)、200μg/ml(P<0.05)的臭灵丹酸均能抑制A/PR/8/34(H1N1)聚合酶活性,而不能抑制A/China/LZP/2017(H3N2)聚合酶活性,进一步判断了臭灵丹酸作用于H1N1的PB1、PB2、PA、NP。对于宿主中的炎症通路,100μg/ml臭灵丹酸在mRNA水平(P<0.05)和蛋白水平均能有效抑制模式识别受体RIG-I过表达。然后,使用实时荧光定量PCR验证臭灵丹酸在100μg/ml浓度下有效抑制A549细胞炎症通路中NF-κB通路诱导的促凋亡因子TRAIL/Fasl(P<0.05)的过表达,使用蛋白免疫印迹实验验证100μg/ml臭灵丹酸能抑制炎症相关蛋白NF-κB,ERK的磷酸化及半胱天冬酶3/7过表达。随后,使用实时荧光定量PCR发现臭灵丹酸在100μg/ml浓度下能有效抑制A549细胞干扰素通路中的STAT(P<0.05)、IFN-α(P<0.05)、IFN-β(P<0.05)mRNA的过表达。及使用蛋白免疫印迹实验验证100μg/ml臭灵丹酸能抑制干扰素通路中STAT蛋白磷酸化。最后,使用实时荧光定量PCR验证100μg/ml臭灵丹酸也能有效抑制氧化通路中PD-L1(P<0.05)、PD-L2(P<0.05)的过表达。结论:臭灵丹药效部位有119个化学成分,具有体内外抗流感病毒活性,证实该部位能有效发挥抗流感病毒作用。药效部位中的臭灵丹酸作用机制一是以PB1、PB2、PA、NP为靶点抑制H1N1病毒增殖,二是通过抑制RIG-I/NF-KB/STAT1/I型干扰素和PD-L1/2的激活达到抗炎抗氧化作用来发挥抗病毒作用。
叶毅[9](2020)在《潘高寿川贝枇杷膏对流感的防治作用研究》文中认为目的甲型流感是一种高传染性急性呼吸道传染病,给世界造成极大的经济及医疗负担。尽管现在已有一批对流感行之有效的药物,但对流感的药物耐药性问题日益增多。很多中药、方剂对甲流都有一定的防治作用,本文旨在评价潘高寿川贝枇杷膏对流感病毒的防治作用。方法1.鸡胚培养法观察药物对甲流病毒的防治作用:以不同浓度的药物对流感病毒感染鸡胚进行药物干预进行预防及治疗实验,以0.5%鸡血红细胞对鸡胚尿囊液进行血凝实验,判断药物对流感病毒感染鸡胚的药效。2.细胞培养法观察药物对甲流病毒的防治作用:以狗肾细胞(MDCK细胞)为实验细胞,MTT法测定药物对MDCK细胞的毒性,血凝法判断药物对流感病毒的抑制作用。3.采用流感病毒肺损伤模型观察药物对流感感染小鼠的防治作用:以病毒滴鼻感染小鼠,观察药物对模型小鼠的死亡保护率、肺指数及病理,评价药物对甲型流感病毒的防治作用。4.酶联免疫吸附实验(Elisa)测定药物对流感感染小鼠鼠肺肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1 β)及干扰素γ(IFN-γ)含量的影响。5.酶联免疫吸附实验测定药物对流感感染小鼠鼻咽冲洗液、肺泡灌洗液、肠道冲洗液中分泌性抗体(SIgA)及血清IgG含量的影响。结果1.毒性试验中,潘高寿川贝枇杷最大受试验浓度430mg/胚对鸡胚有明显毒性;215mmg/胚剂量下鸡胚均为活胚,根据该实验结果确定后续抗流感病毒实验中潘高寿川贝枇杷膏的起始实验剂量为172mg/胚。抑制作用中,潘高寿川贝枇杷膏对流感病毒有一定的预防作用(高、低剂量对甲型流感病毒有50%、16.7%的抑制作用)与较好的治疗作用(高中低剂量对甲型流感病毒分别有100%、83.33%及33%的抑制作用,且存在量效关系。2.利用Reed-Muench法计算所得,川贝枇杷膏在MDCK细胞上对半数毒性浓度为57.68mg.mL-1。根据实验结果,选择80%的TC50作为后续实验浓度,即40mg·mL-1作为后续抗流感病毒体外药效实验浓度。对病毒的抑制实验,预防作用中,川贝枇杷膏在有毒剂量 40mg·mL-1,及无毒剂量 20mg·mL-11、10mg·mmL-1、5mg·mL-1、2.5mg·mL-1、1.25mg·mL-1下仍能抑制病毒对红细胞的凝集作用;在治疗作用中,川贝枇杷膏在有毒剂量40mg.mL-1及无毒剂量20mg.mL-1和10mg.mL-1下能抑制流感病毒对红细胞的凝集作用。3.川贝枇杷膏能能抑制因病毒性肺炎引起的肺指数增加,与病毒对照组相比差异具有统计学意义(高剂量P<0.01,中剂量P<0.05),且表现出量效关系。川贝枇杷膏对流感感染小鼠能起到一定的死亡保护作用,提高存活率,与病毒对照组相比差异有统计学意义(高剂量P<0.05)。贝枇杷膏能减轻流感感染小鼠肉眼及光镜下的病理评分,改善肺损伤。与病例对照组相比差异有统计学意义(高剂量肉眼观评分P<0.01,镜下评分P<0.05)。光镜下,高剂量组小鼠肺组织肺泡壁完整,肺泡腔炎性渗出细胞少,上皮细胞脱落轻微,肺间隔未见塌陷、增厚,淋巴细胞、中性粒细胞浸润轻微,血管未见明显充血。细气管腔内未见明显炎细胞渗出,未发病区肺泡未见代偿性肺气肿产生,中低剂量介于病毒对照组及高剂量之间。4.与病毒对照组(模型组)相比,给药川贝枇杷膏后能改善流感感染小鼠肺内细胞因子浓度(降低肺内TNF-α,高中剂量P<0.01,低剂量P<0.05;降低IL-1 β,高剂量P<0.05;提高IFN-γ,P<0.05),差异具有统计学意义。5.川贝枇杷膏干预流感病毒感染小鼠能提高小鼠分泌抗体的量,升高差异与病毒对照组相比有统计学意义,尤以高剂量组最为显着。肺泡灌洗液SIgA(高剂量、中剂量P<0.01,低剂量P<0.05),肺泡灌洗液SIgA(高剂量P<0.05),肠道冲洗液 SIgA(高剂量 P<0.05),血清 IgG(P<0.05)。结论川贝枇杷膏在鸡胚、细胞水平能抑制病毒增殖,在流感模型小鼠体内能刺激黏膜局部免疫反应分泌抗体,起到抗病毒的作用,同时能调节抑制促炎因子的上调,起到对炎症因子的调节作用,减轻炎症对肺组织的病理损害,从而对流感起到防治作用。
王晓晨[10](2020)在《H1N1pdm09流感重症肺炎患者耐药位点筛查及H275Y突变与奥司他韦耐药相关性研究》文中指出目的:探究H1N1pdm09流感重症肺炎患者中病毒奥司他韦耐药突变的存在情况及H275Y突变对奥司他韦疗效的影响。方法:1.收集2017年12月至2018年3月浙江大学医学院附属第一医院实验室确认的H1N1pdm09流感患者临床信息及标本并分为重症肺炎组和无重症肺炎组,通过测序病毒的神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)基因筛查奥司他韦耐药位点。2.分离培养奥司他韦耐药突变的、部分无耐药突变的病毒以及H1N1pdm09流感病毒参考株A/California/04/2009,培养物进行NA活性实验和奥司他韦NA抑制实验,根据世界卫生组织的标准判定病毒体外耐药程度。3.将相同浓度的耐药病毒和参考株分别感染6周龄雌性Balb/c小鼠,同时给药奥司他韦。取感染后第2、4和6天的肺组织,分别检测其中病毒载量的变化,并对感染后第6天的肺组织进行HE染色观察。结果:1.共测定了H1N1pdm09流感43名重症肺炎患者和257名无重症肺炎患者的病毒NA基因,其中H275Y突变是两组患者中检出的唯一一种奥司他韦耐药突变,其在重症肺炎患者中检出6例(14.0%),在无重症肺炎患者中检出1例(0.4%),两组的检出率具有显着性差异(P<0.001)。2.根据NA活性实验的结果,分离培养的上述7株发生H275Y耐药突变的病毒中有3株因活性太低无法进行奥司他韦NA抑制实验。进一步,奥司他韦NA抑制实验显示,奥司他韦对发生H275Y耐药突变的病毒抑制性高度降低,对无耐药突变的病毒正常抑制。3.感染2天后H275Y耐药突变病毒在小鼠肺部的载量显着高于参考株(P=0.035),第4和6天后其和参考株在小鼠肺部的载量无统计学差异。HE染色结果显示,耐药突变病毒和参考株均可导致小鼠肺部出现肺泡壁增宽、炎症细胞浸润和细支气管上皮细胞坏死等病理改变。结论:1.病毒基因奥司他韦耐药突变在H1N1pdm09流感重症肺炎患者中出现的频率显着高于无重症肺炎患者。2.体外条件下奥司他韦对发生H275Y耐药突变的H1N1pdm09流感病毒的抑制性高度降低。3.发生H275Y耐药突变的H1N1pdm09病毒在体内会延缓奥司他韦的抗病毒疗效,也可表现出与敏感病毒类似的致病力。4.在H1N1pdm09流感重症肺炎的防治过程中应当关注病毒是否出现奥司他韦耐药。
二、甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展(论文提纲范文)
(1)2017-2019年太原市某哨点医院流感监测结果和临床特征分析(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
常用缩写词中英文对照表 |
前言 |
第一部分 2017-2019年山西医科大学第一医院发热门诊的流感监测结果分析 |
1 对象与方法 |
1.1 研究对象 |
1.2 研究方法 |
1.3 数据处理 |
2 结果 |
2.1 流感病毒的检出情况 |
2.2 四组流感患者的分布情况比较 |
3 讨论 |
4 结论 |
第二部分 36 例流感住院患者的临床特征分析 |
1 对象与方法 |
1.1 研究对象 |
1.2 研究方法 |
1.3 数据处理 |
2 结果 |
2.1 一般资料的比较 |
2.2 临床特征的比较 |
2.3 治疗转归的比较 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
综述 流行性感冒病原学特征和抗流感病毒药物的研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
(2)双花柴芩散治疗小儿流行性感冒(风热犯卫证)的临床疗效观察(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
英文缩略语 |
引言 |
文献综述 |
1 西医学对流行性感冒的认识及研究进展 |
2 中医学对流行性感冒的认识及研究进展 |
3 讨论 |
临床研究 |
1 临床资料 |
1.1 研究对象来源 |
1.2 诊断标准 |
1.3 纳入病例标准 |
1.4 排除病例标准 |
1.5 剔除病例标准 |
1.6 脱落病例标准 |
2 研究方法 |
2.1 概述 |
2.2 治疗方案 |
2.3 观测指标 |
2.4 疗效判定 |
2.5 统计方法 |
3 研究结果 |
3.1 病例纳入情况 |
3.2 基线特征分析 |
3.3 治疗结果分析 |
3.3.1 完全退热时间 |
3.3.2 临床症状缓解时间 |
3.3.3 中医证候积分 |
3.3.4 西医症状积分 |
3.3.4.1 临床症状 |
3.3.4.2 功能 |
3.3.4.3 对父母的影响 |
3.3.5 临床疗效 |
3.4 安全性评估 |
3.4.1 实验室检查 |
3.4.2 不良反应 |
讨论 |
1 小儿时行感冒(风热犯卫证)的病因病机 |
2 组方思想 |
3 方药分析 |
4 疗效分析 |
5 创新点 |
6 不足与展望 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
个人简介 |
(3)基于B细胞分离技术筛选马流感中和抗体(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
主要符号对照表 |
第一章 绪论 |
1.1 马流行性感冒 |
1.1.1 马流行性感冒概述 |
1.1.2 EIV基因组结构及功能 |
1.1.3 EIV的流行情况 |
1.1.4 疫苗及其诱导的免疫保护应答反应 |
1.1.5 中和抗体在马流感免疫保护中的作用 |
1.2 中和抗体的制备及筛选方法 |
1.2.1 单克隆抗体技术 |
1.2.2 噬菌体展示技术 |
1.2.3 酵母表面展示技术 |
1.2.4 哺乳动物细胞展示技术 |
1.2.5 核糖体展示技术 |
1.2.6 单细胞抗体基因扩增技术 |
1.3 本研究的目的与意义 |
第二章 马源IgG单克隆抗体的制备 |
2.1 实验材料 |
2.1.1 质粒、菌株、细胞及实验动物 |
2.1.2 主要试剂 |
2.1.3 主要仪器 |
2.1.4 主要溶液 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 马源IgG真核表达质粒的构建和鉴定 |
2.2.2 马源IgG真核表达质粒的表达验证及蛋白纯化 |
2.2.3 动物免疫 |
2.2.4 血清抗体效价检测 |
2.2.5 流式筛选获得马源IgG特异性的记忆性B淋巴细胞 |
2.2.6 构建马源IgG单克隆抗体的重链、轻链可变区线性基因表达载体 |
2.2.7 马源IgG重组单克隆抗体表达验证及抗体的纯化 |
2.2.8 马源IgG重组单克隆抗体的反应性鉴定 |
2.3 实验结果 |
2.3.1 重组质粒构建及表达情况 |
2.3.2 马源IgG蛋白(恒定区)的表达和纯化 |
2.3.3 血清抗体效价检测 |
2.3.4 特异性识别马源IgG蛋白的小鼠单个记忆性B淋巴细胞的分离 |
2.3.5 马源IgG重组抗体重链、轻链可变区基因PCR扩增 |
2.3.6 马源IgG重组单克隆抗体纯化结果 |
2.3.7 马源IgG重组单克隆抗体反应性检测 |
2.4 小结 |
第三章 高通量马源抗体筛选平台在筛选马流感弱毒疫苗诱导中和抗体的研究 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 病毒、细胞和血清样本 |
3.1.2 实验动物 |
3.1.3 实验试剂及耗材 |
3.1.4 主要仪器 |
3.1.5 主要溶液配置 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 马源单个B细胞抗体制备技术平台(协助完成) |
3.2.2 马流感疫苗免疫程序及样本采集 |
3.2.3 马流感疫苗免疫马匹最佳中和作用的血液样本采集及鉴定 |
3.2.4 获得马流感HA重组抗体的功能性验证与马流感病毒JL89-HA蛋白的结合力检测 |
3.2.5 马流感HA重组单克隆抗体的中和能力评价 |
3.3 实验结果 |
3.3.1 疫苗免疫马血清HA抗体效价检测 |
3.3.2 疫苗免疫马血清中HA抗体的中和作用效果的验证 |
3.3.3 HA特异性记忆性B淋巴细胞的分离及抗体重链和轻链的PCR扩增 |
3.3.4 马流感HA重组单克隆抗体与JL89-HA蛋白的结合作用检测 |
3.3.5 马流感HA重组抗体对马流感病毒JL89的血凝抑制结果 |
3.3.6 马流感HA重组抗体和JL89-HA蛋白亲和力检测 |
3.3.7 马流感HA重组单克隆抗体对马流感毒株的中和作用 |
3.4 小结 |
第四章 全文讨论 |
第五章 全文结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简历 |
(4)基于自噬途径研究小柴胡汤对甲型流行性感冒的干预作用(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
英文缩略词表 |
前言 |
第一部分 理论研究 |
一、现代医学对甲型流行性感冒的认识 |
1 流感病毒的致病机制:感染与免疫 |
2 流感病毒与细胞自噬 |
3 现代医学对甲型流行性感冒的治疗 |
4 基于科学计量学(citespace)探讨甲型流感研究领域与自噬领域的共同机制 |
二、中医对甲型流行性感冒的认识 |
1 甲型流行性感冒的病因病机 |
2 甲型流行性感冒的辨证论治 |
三、伤寒少阳病的病因病机演变及特点 |
1 少阳之源 |
2 伤寒少阳病的病因病机、证治及演变 |
四、小柴胡汤治疗甲型流行性感冒的历史渊源 |
1 小柴胡汤方解 |
2 小柴胡汤对甲型流行性感冒的治疗 |
3 小柴胡汤的现代药理学研究 |
五、小柴胡汤与细胞自噬 |
1 细胞自噬与流感致病的中医认识 |
2 小柴胡汤主要成分对细胞自噬的调控 |
第二部分 基于网络药理学方法探讨小柴胡汤治疗甲型流行性感冒的潜在作用机制 |
1 资料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
第三部分 实验研究 |
实验一 不同方式制备的小柴胡汤对甲型H1N1 流感病毒感染MDCK细胞的抑制作用 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验二 小柴胡汤颗粒剂对H1N1 流感病毒感染人A549 细胞的抑制作用 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验三 小柴胡汤及拆方颗粒剂对甲型流感病毒感染MDCK细胞自噬流的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
实验四 小柴胡汤及拆方颗粒剂对甲型流感病毒感染MDCK细胞自噬作用机制的影响 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 实验结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
结论 |
1 理论研究思路及结果讨论 |
2 不足与展望 |
3 创新点 |
附录 |
综述一 甲型H1N1 流行性感冒的溯源与防治 |
参考文献 |
综述二 中医对甲型流行性感冒的认识 |
参考文献 |
附录三 攻博期间发表论文情况 |
致谢 |
(5)复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒的相关meta分析及临床疗效回顾性研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
前言 |
第一部分 清热解表法治疗流行性感冒的meta分析 |
1 资料与方法 |
1.1 检索策略 |
1.2 纳入标准 |
1.3 排除标准 |
1.4 研究筛选 |
1.5 资料提取 |
1.6 纳入研究的方法学质量评价 |
1.7 统计学处理 |
2 结果 |
2.1 文献筛选流程及结果 |
2.2 纳入研究的基本特征 |
2.3 纳入研究质量评价结果 |
2.4 纳入研究的偏倚风险评价结果 |
2.5 meta分析结果 |
3 小结 |
第二部分 复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒(风热犯卫证)的临床疗效回顾性研究 |
1 研究目的 |
2 资料与方法 |
2.1 研究对象 |
2.2 诊断标准 |
2.3 病例纳入标准 |
2.4 病例排除标准 |
2.5 治疗及分组方法 |
2.6 病例研究方法 |
2.7 观察指标 |
2.8 临床疗效评价 |
2.9 数据统计分析 |
3 研究结果 |
3.1 病例纳入及分组结果 |
3.2 观察组和对照组性别及年龄情况比较 |
3.3 治疗前中医证候量化评分比较 |
3.4 治疗前两组hs-CRP及PCT比较 |
3.5 两组总体疗效比较 |
3.6 两组退热时间比较 |
3.7 治疗后两组中医证候量化评分比较 |
3.8 治疗后两组hs-CRP及 PCT比较 |
3.9 安全性比较 |
4 小结 |
讨论 |
1 流行性感冒概述 |
1.1 流行病学特点 |
1.2 流行性感冒的临床表现 |
2 流感病毒的特点 |
2.1 病原学 |
2.2 作用机制 |
2.3 病理改变 |
2.4 稳定性 |
3 中医对流行性感冒病因病机的研究 |
3.1 外感六淫非时之气及时行疫邪是外因 |
3.2 正气不足是发病的内因 |
3.3 流行性感冒的病机 |
4 中医对流行性感冒的辨证 |
5 流行性感冒的西医治疗 |
5.1 抗病毒药物 |
5.2 疫苗研究 |
5.3 对症治疗 |
5.4 重症病例的治疗 |
6 复方银翘感冒合剂药物组成及药理研究 |
7 临床不足与展望 |
结语 |
参考文献 |
附录 文献综述 中医药治疗流行性感冒的研究现状 |
参考文献 |
致谢 |
(6)中医药治疗流行性感冒的用药规律研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
文献综述 |
综述一 流行性感冒的中西医研究进展 |
1 现代医学对流感及流感病毒的认识 |
2 现代医学对流感的防治方法 |
3 中医学对流感的认识 |
4 现代中医药治疗流感的基本原则及常用方药 |
5 中医药治疗流感的作用机制研究 |
综述二 数据挖掘在中医药领域中的应用 |
参考文献 |
前言 |
第一部分 基于数据挖掘中药治疗流行性感冒的古今用药规律研究 |
一、资料与方法 |
二、结果 |
三、讨论 |
1 流感中成药处方的用药分析 |
2 古籍流感相关处方的用药分析 |
3 古今流感处方的用药差异 |
4 表寒里热证型的流感用药情况分析 |
5 基于专家意见与处方挖掘制定流感新方 |
第二部分 “葛芩表里双解方”核心药对的网络药理学研究 |
1 方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
(7)20172018年广州市乙型流感病毒HA、NA基因特征及中西药抗病毒药效初筛研究(论文提纲范文)
中英文缩略词表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一部分 2017~2018年广州市乙型流感病毒HA、NA基因特征分析 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第二部分 中西药抗乙型流感病毒药效初筛及病毒增殖能力检测 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第三部分 乙型流感病毒反向遗传学平台构建 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
全文结论 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读研究生学位期间发表的论文 |
致谢 |
(8)臭灵丹药效部位抗流感病毒及抗炎作用机制研究(论文提纲范文)
英文缩略词表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一部分 臭灵丹药效部位及臭灵丹酸提取鉴定 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
第二部分 臭灵丹药效部位体内外抗流感病毒药效研究 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
第三部分 臭灵丹酸抗流感病毒抗炎机制研究 |
前言 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
全文结论 |
全文创新点 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读研究生学位期间发表的论文 |
致谢 |
(9)潘高寿川贝枇杷膏对流感的防治作用研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一章 文献研究 |
第一节 流感概述 |
一、流行性感冒概述 |
二、流行性感冒病毒概述 |
三、流行性感冒与细胞因子的关系 |
四、流感病毒与天然免疫的关系 |
第二节 防治流感病毒研究进展 |
一、西医研究进展 |
二、中医研究进展 |
三、潘高寿川贝枇杷膏概述 |
第二章 实验研究 |
第一节 潘高寿川贝枇杷膏在鸡胚水平对流感病毒的防治作用 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、实验结果 |
四、结论 |
第二节 潘高寿川贝枇杷膏在细胞水平对流感病毒的防治作用 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、实验结果 |
四、结论 |
第三节 潘高寿川贝枇杷膏对流感病毒感染小鼠的影响 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、实验结果 |
四、结论 |
第四节 潘高寿川贝枇杷膏对流感病毒感染小鼠鼠肺TNF-α、IL-1β、IFN-γ分泌的影响 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、实验结果 |
四、结论 |
第五节 潘高寿川贝枇杷膏对流感病毒感染小鼠鼻咽冲洗液、肺泡灌洗液及肠道冲洗液sIgA及血清IgG的影响 |
一、实验材料 |
二、实验方法 |
三、实验结果 |
四、结论 |
第六节 讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 英文缩略词注释 |
在校期间发表论文情况 |
致谢 |
统计学审核证明 |
(10)H1N1pdm09流感重症肺炎患者耐药位点筛查及H275Y突变与奥司他韦耐药相关性研究(论文提纲范文)
致谢 |
中文摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
1 引言 |
2 材料与方法 |
2.1 技术路线 |
2.2 研究对象 |
2.3 实验材料 |
2.4 实验方法 |
3 结果 |
3.1 H1N1pdm09流感病毒的流行概况与患者的人口学特征 |
3.2 H1N1pdm09 病毒NA基因耐药突变情况 |
3.3 H1N1pdm09流感病毒对奥司他韦的体外敏感性 |
3.4 耐药病毒的体内生物学特征(动物水平) |
3.5 H1N1pdm09流感耐药病毒感染者的临床特征 |
4 讨论 |
5 结论 |
参考文献 |
综述 流感病毒对神经氨酸酶抑制剂耐药的研究进展 |
参考文献 |
作者简历及攻读学位期间发表的论文 |
四、甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展(论文参考文献)
- [1]2017-2019年太原市某哨点医院流感监测结果和临床特征分析[D]. 兰旭. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]双花柴芩散治疗小儿流行性感冒(风热犯卫证)的临床疗效观察[D]. 任晓婷. 长春中医药大学, 2021(01)
- [3]基于B细胞分离技术筛选马流感中和抗体[D]. 张佳琦. 中国农业科学院, 2021
- [4]基于自噬途径研究小柴胡汤对甲型流行性感冒的干预作用[D]. 王上. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]复方银翘感冒合剂治疗流行性感冒的相关meta分析及临床疗效回顾性研究[D]. 游泓. 湖北中医药大学, 2021(10)
- [6]中医药治疗流行性感冒的用药规律研究[D]. 李云. 北京中医药大学, 2021(08)
- [7]20172018年广州市乙型流感病毒HA、NA基因特征及中西药抗病毒药效初筛研究[D]. 夏炫梓. 广州医科大学, 2020(01)
- [8]臭灵丹药效部位抗流感病毒及抗炎作用机制研究[D]. 曾志奇. 广州医科大学, 2020(01)
- [9]潘高寿川贝枇杷膏对流感的防治作用研究[D]. 叶毅. 广州中医药大学, 2020(06)
- [10]H1N1pdm09流感重症肺炎患者耐药位点筛查及H275Y突变与奥司他韦耐药相关性研究[D]. 王晓晨. 浙江大学, 2020(02)